MRC-5（有限细胞系）人胚肺成纤维细胞

商品属性：

产品名称	规格	货号
MRC-5（有限细胞系）人胚肺成纤维细胞	1×10^6cells	BJ-X863

公司产品仅供科研研究使用不得用于临床诊断！
1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

MRC-5（有限细胞系）人胚肺成纤维细胞2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结

晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；




二、细胞培养操作
收货方式 ：T25瓶 ，冻存管
收货处理 ：观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态    收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏
传代密度 ：细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养    第二天换液并检查细胞密度
传代比例 ：首次传代建议1：2传代 ，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿    一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。         b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞贴壁情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。         c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。
9. 注意：1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
公司正在出售的产品：
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原代内皮细胞特制基础无血清培养基Many types of cells包装：500/100ml 兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA 试剂盒 IgG/Bio 生物素标记的兔抗长爪沙鼠IgG 0.1ml
FOXD3： 叉头蛋白D3抗体 MA, 小鼠星形胶质细胞 Mouse
HTEpC-c 人类气管上皮细胞(HTEpC) 500,000cells 人脑血管平滑肌细胞HBVSMC 兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA 试剂盒 IgG-Fc/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
FOXB1： 叉头蛋白B1抗体 CM-H007人肺泡上皮细胞完全培养基100mL
EFNA5 Others Cynomolgus 食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 人细胞裂解液 (阳性对照) 大鼠纤维蛋白原γ(FGγ)ELISA试剂盒 AChE  大鼠乙酰胆碱酯酶 96T
MUSK： 肌肉骨骼受体酪酸激酶抗体 人支气管上皮细胞总RNAHBEpiC NA
PIEC猪髋动脉内皮细胞 PIEC pig iliac artery endothelial cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠纤维蛋白原β链(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)ELISA试剂盒 BGP(Osteocalcin/Bone Gla-protein) 兔骨钙素 ELISA试剂盒 96T
Mycobacterium tuberculosis Ag85B： 结核分枝杆菌抗体 ULBP1 Others Human 人 ULBP1 / N2DL1 人细胞裂解液 (阳性对照)
CL-0411PA-1(人卵巢腺癌细胞)5×106cells/瓶×2 大鼠纤维蛋白原β(FGβ)ELISA试剂盒 CDT  大鼠糖缺失性转铁蛋白 96T
HRG Beta1： 神经胶质生长因子/神经调节蛋白β抗体 大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-2 7721肝癌细胞，7721细胞 HuT78(T淋巴细胞白血病细胞)
ANGPT4 Others Human 人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 人细胞裂解液 (阳性对照) 人毒性休克综合征毒素1(TSST-1)ELISA 试剂盒 GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide 胰高血糖素样肽-1(多肽) 0.5mg
HINT1： 组酸三聚体核苷结合蛋白1抗体 T-101B胰蛋白酶(含100mL 酶解缓冲液)10mL
HS-1细胞，人皮肤癌细胞系 滑念珠菌 小鼠胰腺癌细胞(B类);Pan02 人丁型肝炎IgM(HDV IgM)ELISA 试剂盒 GLP-1 peptide 胰高血糖素样肽-1(多肽) 0.1mg
HDAC3： 组蛋白去乙酰化酶3抗体 GFRA3 Others Human 人 GFRA3 / GFR-alpha-3 人细胞裂解液 (阳性对照)
MRC-5（有限细胞系）人胚肺成纤维细胞PDGFC Others Mouse 小鼠 PDGF-C / SCDGF 人细胞裂解液 (阳性对照) 大鼠多聚蛋白1(MMRN1)ELISA试剂盒 irGH(Human Immunoreactive growth hormone)  人免疫反应性生长激素 96T
Phospho-PSD93 (Tyr340)： 0酸化突触后密度蛋白93抗体 高背鲫鱼尾鳍细胞;GBJd
SW 1353人软骨肉瘤细胞 SW 1353 in human chondrosarcoma cells L-15培养基+10%FBS 大鼠多功能肽酶2(LMP2)ELISA试剂盒 MS(Human melatonin sulfate)  人褪黑色素 96T
Phospho-PSD95 (Tyr236 + Tyr240)： 0酸化突触后密度蛋白95抗体 IL27RA Others Human 人 IL27Ra / TCCR / WSX1 人细胞裂解液 (阳性对照)
EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMYF 大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)ELISA试剂盒 IL-1 Alpha  大鼠白介素1α 96T