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- 信帆生物
- XJC5158
- 国产
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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100
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信帆生物
（WST-1法）
一、试剂组成与配制
二、所需仪器
任意规格酶标仪（450±10nm波长）、普通一次性96孔微孔板（附送一块）、微
量移液器（单道移液器、多道移液器）、恒温孵育箱
四、注意事项
1、请用多道移液器来加底物应用液以缩短时间，减少各孔间的误差。
2、用96孔板操作时，轻轻震荡孔板，保证样本与试剂的充分接触。
3、正式检测之前，需挑取1-2例正常组样本，稀释成不同浓度进行预实验，选
取抑制率在40%-60%的这一孔的浓度，进行正式批量试验。
4、此方法特异性强，专一性测定SOD，排除了类SOD的测定干扰。如需要测定
类SOD，请购买本所的类SOD试剂盒！
5、此法抑制率可达100%。
6、对照孔、对照空白孔一批实验只需要各做1-3孔,测定空白孔视情况而定(样本
有颜色、有浊度等需要单独做，其它情况可以随机挑选1-3个样本做)。
五、单位定义
单位定义：在本反应体系中SOD抑制率达50%时所对应的酶量为一个
SOD活力单位（U）。SOD的活力单位在不同的实验条件下有不同的定义，
例如血清（浆）、组织、培养细胞、红细胞、植物、药物、化妆品、饮料等
样本不同，因而计算公式也不同，具体参照附录。
六、测定意义
本试剂盒测定超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）活力，可
测血清(浆)、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、红细胞、白细胞、血小
板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞及亚细胞水平（线
粒体、微粒体）中的SOD活力，并可检测微生物、药物、食品、饮料、化妆
品中的SOD活力。
七、主要技术性能参数
1、对照OD≥0.2
2、反应温度：37℃
波长=450nm（±10nm）
3、批内CV=5.05%
4、批间CV=3.32%
5、检出限：0.5U/mL
附录Ⅰ：血清（浆）等液体样本中SOD的测定
一、样本前处理
1、观察血清（浆），如有浑浊需3500转/分左右，离心10分钟，取上清待用。
2、将澄清的血清（浆）用生理盐水稀释成不同浓度进行预实验。
附录Ⅱ： 动物组织样本中SOD的测定
一、样本前处理：
1、准确称取组织重量，按照重量（g）:体积(mL)=1 :9的比例加入9倍体积生理
盐水，剪碎组织，冰水浴制备匀浆，2500～3000转/分钟，离心10分钟，取
上清即10%匀浆上清液待测。
2、蛋白测定：上述样本准备好后，同时可以用本所的BCA或考马斯亮蓝试剂
盒测定蛋白浓度，用于计算。
3、将10%组织匀浆上清用生理盐水稀释成不同浓度进行预实验。
三、单位定义：
在本反应体系中SOD抑制率达50%时所对应的酶量为一个SOD活力单位（U）。
附录Ⅲ：培养细胞中SOD的测定
一、样本前处理：
1、培养细胞的收集：
①、悬浮培养的细胞，可直接通过离心收集沉淀细胞（1000 转/分，离心 10 分
钟，弃上清留沉淀细胞）；
②、贴壁培养的细胞，吸去上清，可通过细胞刮直接将细胞刮下；或者是用 0.25%
的胰酶室温消化 2～3 分钟，加培养液终止消化，用微量移液器轻轻吹打，
将所有液体吸出转入 EP 管，然后 1000 转/分，离心 10 分钟弃上清，留沉
淀细胞，再加入 1mL PBS 轻轻吹打，再次 1000 转/分，离心 10 分钟弃上清，
留沉淀细胞待用。如暂时不做，则可以将细胞低温冻存，温度越低越好。
2、培养细胞的破碎：（以下任选一种）
①、研磨破碎：在细胞沉淀中加入一定量（10 6的细胞一般加 0.3～0.5mL）的
缓冲液（缓冲液可以用 PBS 或者是生理盐水），用手动玻璃匀浆器冰水浴
研磨 3～5 分钟，或者是用卡富隆电动研磨器冰水浴研磨 3 分钟待测；
②、超声破碎：在细胞沉淀中加入一定量（10 6的细胞一般加 0.3～0.5mL）的
缓冲液（缓冲液可以用 PBS 或者是生理盐水），需保证超声探头在液面以
下。功率 300W，冰水浴，每 3～5S 超声一次，间隔 4 次（每次间隔时间
为 30S 左右）；（推荐此法）
③、反复冻融：可以用液氮进行反复冻融，让细胞在 EP 管或者是冻存管中加
入一定量的低渗液或者蒸馏水，直接放入液氮中 3～5 秒，立即提出转入
-20℃冰箱（20～30 秒），再取出室温解冻，解冻后再按前面重复 3 次。（注
意从液氮中取出不可直接置于室温解冻，这样 EP 管等容易炸裂导致样本
损失，所以一定要用冷冻进行梯度解冻）；
④ 化学裂解：贴壁培养的细胞，可直接将上清吸去后，直接在孔板或是瓶中
加入一定量的裂解液（覆盖满细胞），裂解 30～40 分钟（可用显微镜观察
细胞破碎情况），再用微量移液器吸出待测。根据需要可用生理盐水或 PBS
进行一定的稀释。
3、蛋白测定：上述样本准备好后，同时可以用本所的 BCA 或考马斯亮蓝试剂盒
测定蛋白浓度，用于计算。
附录Ⅳ：植物组织中SOD的测定
一、样本前处理：
取植物组织，用蒸馏水洗净表面污垢后，用吸水纸擦干，取适量于研钵中，
剪碎，加入适量液氮，快速研磨成粉，取粉末称重，按重量（g）：体积(mL)=1:9
的比例，加入9倍体积的磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液︰0.1mol /L pH7～7.4），
漩涡混匀3分钟，3500转/分以上，离心10分钟取上清即10%匀浆上清液，再用
磷酸盐缓冲液稀释成不同浓度进行预实验。（对于水分含量较多的植物样本如
番茄叶片或一些植物嫩叶等也可参照动物组织样本的前处理方法制成10%的
匀浆）
注：植物组织匀浆离心后的上清尽量澄清透亮，可适当加大离心转速及离心时间。
附录Ⅴ：全血、红细胞中SOD的测定
一、样本前处理：
全血：收集肝素抗凝全血，轻轻颠倒混匀，定量吸取一定量的全血，加入4倍体
积的冷蒸馏水，漩涡充分混匀30S，静置10分钟充分溶血（对光观察，溶
液澄清透亮），即为5倍溶血液，再用蒸馏水稀释成不同浓度进行试验。
红细胞：收集肝素抗凝全血，轻轻颠倒混匀，离心分离上层血浆（离心转速根
据动物种属有区别，如小鼠一般1000～1500转/分，大鼠、兔子一般
2000～2500转/分，人一般2500～3000转/分，转速过高可能会导致红细
胞破碎，血浆溶血），在下层红细胞中加入3倍体积的生理盐水，轻轻
颠倒混匀，500转/分离心5分钟，弃上清留沉淀红细胞（洗涤红细胞），
定量吸取一定量的红细胞，加入9倍体积的冷蒸馏水，漩涡充分混匀30
秒，静置10分钟充分溶血（对光观察，溶液澄清透亮），即为10倍溶
血液，再用蒸馏水稀释成不同浓度进行试验。
注：1、同时需测定5倍或10倍溶血液中的血红蛋白浓度，用于结果计算。（本
所有血红蛋白测试液出售 C021）
2、做不同浓度溶血液预实验摸索时，每个浓度都要做测定空白孔，批量检
测时，同浓度情况下，测定空白孔只需做1-2孔。
超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒
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文献和实验大鼠 超氧化物歧化酶（ SOD ） 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 超氧化物歧化酶（SOD ） 的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠 超氧化物歧化酶（ SOD ） 水平。用纯化的 大鼠 SOD 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 超氧化物歧化酶（ SOD ） ，再与 HRP
【实验原理】 SOD是含金属辅基的酶，它催化以下反应： 02 - +02 - + 2H+ H2 02 +02 由于超氧阴离子自由基02 - 寿命短，不稳定，不易直接测定SOD活性,而采用 间接的方法。目前常用的方法
人 超氧化物歧化酶（SOD ） 酶联免疫 分析 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中 超氧化物歧化酶（SOD） 的含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 人 超氧化物歧化酶（SOD ） 水平。用纯化的 人 SOD 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 超氧化物歧化酶（SOD ） ，再与HRP 标记的羊抗人抗体结合，形成
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