方法二:按照酶活计算 1. 建立标准曲线:根据标准管的浓度(x,μmol/L)和吸 光度(y,减去浓度为 0 的空白管)做标准方程 y=ax+b。 2. 计算 caspase 4 酶活力: Caspase 4 酶活力单位的定义:One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0 nmol of the colorimetric substrate Ac-LEVD-pNA per hour at 37°C under saturated substrate concentrations。即一个酶活力单位定义为当底 物饱和时,在 37°C 一个小时内可以剪切 1 nmol AcLEVD-pNA 产生 1 nmol 游离的 pNA 的 caspase 4 的酶量。
注: y: 标准品测定 OD 值-空白 OD 值 x: 标准品的浓度 a: 标曲的斜率 b: 标曲的截距 △A:测定孔 OD 值-空白孔 OD 值 V 反总:反应体系总体积,0.1 mL V 样:加入的样本体积,0.05 mL T:反应时间,h Cpr:样本加入检测体系前的蛋白质浓度,mgprot/mL f: 样本加入检测体系前的稀释倍数