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信帆生物
(测 TNOS、iNOS、cNOS 比色法)
一、测定原理:
NOS 催化 L-Arg 和分子氧反应生成 NO,NO 与亲核性物质
生成有色化合物,在 530nm 波长下测定吸光度,根据吸光度的大
小可计算出 NOS 活力。
NOS 主要有两种类型:即结构型(cNOS)和诱导型(iNOS)。结
构型(cNOS)主要存在于神经元和内皮细胞内,依赖钙;诱导型
(iNOS)主要存在于巨噬细胞内,不依赖钙。根据此原理可以分型。
二、试剂组成与配制(50 管/24 样 A014-1-1):
试剂一:底物缓冲液 6mL´2 瓶,-20ºC 以下避光冷冻保存 3
个月。临用前化冻摇匀。没有用完的试剂,可以
-20ºC 以下避光冷冻保存以备下次再用。
试剂二:促进剂淡黄色或白色粉剂´3 支(粉剂量较少,可能附
着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时肉眼不可见,
可将其 4000 转/分钟离心 2 分钟后使用),稀释液
0.6 mL´3 支。-20ºC 以下冷冻保存 6 个月。测试前
取稀释液一支 0.6mL 加入一支粉剂中充分混匀(即
将 1.5mL 小离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的
液体弹下来),测试后剩余试剂可放入-20ºC 以下
冷冻保存,时间不超过一周。若发现粉剂变成黄褐
色或咖啡色,则不可以再用。
试剂三:显色剂(黄色)6mL´1 瓶,4ºC 避光冷藏保存 3 个月。
试剂四:透明剂 6mL´1 瓶,室温保存 6 个月。天冷后会凝
固,37℃水浴变澄清时再使用。
试剂五:终止剂 60mL´2 瓶,4ºC 保存 6 个月。室温低会出
现浑浊,37℃水浴至透明再用。
试剂六:液体 10mL×1 瓶,4℃保存 6 个月。用前请仔细观
察,如有结晶附着在瓶壁或瓶底,可将试剂连同瓶
子一起在 90~100℃热水中摇晃等其完全溶解后,
即可使用。
三、试剂组成与配制(100 管/48 样 A014-1-2):
试剂一:底物缓冲液 6mL´4 瓶,-20ºC 以下避光冷冻保存 3
个月。临用前化冻摇匀。没有用完的试剂,可以
-20ºC 以下避光冷冻保存以备下次再用。
试剂二:促进剂淡黄色或白色粉剂´6 支(粉剂量较少,可能附
着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时肉眼不可见,
可将其 4000 转/分钟离心 2 分钟后使用),稀释液
0.6 mL´6 支。-20ºC 以下冷冻保存 6 个月测试前取
稀释液一支 0.6mL 加入一支粉剂中充分混匀(即将
1.5mL 小离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的液
体弹下来),测试后剩余试剂可放入-20ºC 以下冷
冻保存,时间不超过一周。若发现粉剂变成黄褐色
或咖啡色,则不可以再用。
试剂三:显色剂(黄色)6mL´2 瓶,4ºC 避光冷藏保存 3 个月。
试剂四:透明剂 6mL´2 瓶,室温保存 6 个月。天冷后会凝
固,37℃水浴变澄清时再使用。
试剂五:终止剂 60mL´4 瓶,4ºC 保存 6 个月。室温低会出
现浑浊,37℃水浴至透明再用。
试剂六:液体 10mL×1 瓶,4℃保存 6 个月。用前请仔细观
察,如有结晶附着在瓶壁或瓶底,可将试剂连同瓶
子一起在 90~100℃热水中摇晃等其完全溶解后,
即可使用。
六、正常参考值:
大鼠血清(TNOS):18.69±3.97 U/mL(n=45)
大鼠肾匀浆(TNOS):0.536±0.134 U/mgprot(n=19)
狗血清(TNOS):20.57±3.39 U/mL(n=18)
心肌培养液(TNOS):0.698±0.110U/mL(n=12)
七、注意点:
1、促进剂最好现用现配,配好后尽量一日内用完,如有剩余则
-20ºC 以下保存不超过一周;未配制之前的试剂二促进剂和
稀释液均应-20ºC 以下保存,如淡黄色或白色粉末变成咖啡
色或黄褐色颗粒则失效不可用。
2、试剂六为过饱和溶液,一次实验用不完再用时可能有结
晶,用之前可以再次边沸水浴边用玻璃棒搅拌使其溶解。
3、NOS 活性低,稳定性差,样品或匀浆上清如不马上检测,
应置-20ºC 以下冷冻保存。
4、试剂一与配制好的试剂二应尽量避免反复冻融。
5、室温低时,NOS 试剂五会出现浑浊,如果已经在测试管
中加入了 NOS 试剂五,可将测试管对着灯光,观察有无
结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊,请将每只测试管放到 37ºC
水浴锅中晃动 5 分钟,再比色。
一-氧化氮合成酶(NOS)分型测定试剂盒
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文献和实验人 一氧化氮合成酶(T -NOS) 酶联免疫分析( ELISA ) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(T -NOS) 的 含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮合成酶 (T - NOS) 水平。用纯化的人一氧化氮合成酶 (T - NOS) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
大鼠 一氧化氮合成酶(T -NOS) 酶联免疫分析( ELISA ) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(T -NOS) 的 含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠一氧化氮合成酶 (T - NOS) 水平。用纯化的大鼠一氧化氮合成酶 (T - NOS) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中
人一氧化氮合成酶(T-NOS、iNOS、cNOS)酶联免疫分析(ELISA)
人 一氧化氮合成酶(T -NOS 、iNOS 、cNOS) 酶联免疫分析( ELISA ) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(T -NOS 、iNOS 、cNOS) 的 含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮合成酶 (T - NOS 、 iNOS 、 cNOS) 水平。用纯化的人一氧化氮合成酶
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