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一-氧化氮合成酶(NOS)分型测定试剂盒

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  • 2025年07月08日
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      信帆生物

    一-氧化氮合成酶(NOS)分型测定试剂盒
    (测 TNOSiNOScNOS 比色法)
    一、测定原理:
    NOS 催化 L-Arg 和分子氧反应生成 NONO 与亲核性物质
    生成有色化合物,在 530nm 波长下测定吸光度,根据吸光度的大
    小可计算出 NOS 活力。
    NOS 主要有两种类型:即结构型(cNOS)和诱导型(iNOS)。结
    构型(cNOS)主要存在于神经元和内皮细胞内,依赖钙;诱导型
    (iNOS)主要存在于巨噬细胞内,不依赖钙。根据此原理可以分型。
    二、试剂组成与配制(50 /24 A014-1-1):
    试剂一:底物缓冲液 6mL´2 瓶,-20ºC 以下避光冷冻保存 3
    个月。临用前化冻摇匀。没有用完的试剂,可以
    -20ºC 以下避光冷冻保存以备下次再用。
    试剂二:促进剂淡黄色或白色粉剂´3 (粉剂量较少,可能附
    着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时肉眼不可见,
    可将其 4000 /分钟离心 2 分钟后使用),稀释液
    0.6 mL´3 支。-20ºC 以下冷冻保存 6 个月。测试前
    取稀释液一支 0.6mL 加入一支粉剂中充分混匀(即
    1.5mL 小离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的
    液体弹下来),测试后剩余试剂可放入-20ºC 以下
    冷冻保存,时间不超过一周。若发现粉剂变成黄褐
    色或咖啡色,则不可以再用。
    试剂三:显色剂(黄色)6mL´1 瓶,4ºC 避光冷藏保存 3 个月。
    试剂四:透明剂 6mL´1 瓶,室温保存 6 个月。天冷后会凝
    固,37℃水浴变澄清时再使用。
    试剂五:终止剂 60mL´2 瓶,4ºC 保存 6 个月。室温低会出
    现浑浊,37℃水浴至透明再用。
    试剂六:液体 10mL×1 瓶,4℃保存 6 个月。用前请仔细观
    察,如有结晶附着在瓶壁或瓶底,可将试剂连同瓶
    子一起在 90100℃热水中摇晃等其完全溶解后,
    即可使用。
    三、试剂组成与配制(100 /48 A014-1-2):
    试剂一:底物缓冲液 6mL´4 瓶,-20ºC 以下避光冷冻保存 3
    个月。临用前化冻摇匀。没有用完的试剂,可以
    -20ºC 以下避光冷冻保存以备下次再用。
    试剂二:促进剂淡黄色或白色粉剂´6 (粉剂量较少,可能附
    着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时肉眼不可见,
    可将其 4000 /分钟离心 2 分钟后使用),稀释液
    0.6 mL´6 支。-20ºC 以下冷冻保存 6 个月测试前取
    稀释液一支 0.6mL 加入一支粉剂中充分混匀(即将
    1.5mL 小离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的液
    体弹下来),测试后剩余试剂可放入-20ºC 以下冷
    冻保存,时间不超过一周。若发现粉剂变成黄褐色
    或咖啡色,则不可以再用。
    试剂三:显色剂(黄色)6mL´2 瓶,4ºC 避光冷藏保存 3 个月。
    试剂四:透明剂 6mL´2 瓶,室温保存 6 个月。天冷后会凝
    固,37℃水浴变澄清时再使用。
    试剂五:终止剂 60mL´4 瓶,4ºC 保存 6 个月。室温低会出
    现浑浊,37℃水浴至透明再用。
    试剂六:液体 10mL×1 瓶,4℃保存 6 个月。用前请仔细观
    察,如有结晶附着在瓶壁或瓶底,可将试剂连同瓶
    子一起在 90100℃热水中摇晃等其完全溶解后,
    即可使用。
    六、正常参考值:
    大鼠血清(TNOS):18.69±3.97 U/mLn=45
    大鼠肾匀浆(TNOS):0.536±0.134 U/mgprotn=19
    狗血清(TNOS):20.57±3.39 U/mLn=18
    心肌培养液(TNOS):0.698±0.110U/mLn=12
    七、注意点:
    1、促进剂最好现用现配,配好后尽量一日内用完,如有剩余则
    -20ºC 以下保存不超过一周;未配制之前的试剂二促进剂和
    稀释液均应-20ºC 以下保存,如淡黄色或白色粉末变成咖啡
    色或黄褐色颗粒则失效不可用。
    2、试剂六为过饱和溶液,一次实验用不完再用时可能有结
    晶,用之前可以再次边沸水浴边用玻璃棒搅拌使其溶解。
    3NOS 活性低,稳定性差,样品或匀浆上清如不马上检测,
    应置-20ºC 以下冷冻保存。
    4、试剂一与配制好的试剂二应尽量避免反复冻融。
    5、室温低时,NOS 试剂五会出现浑浊,如果已经在测试管
    中加入了 NOS 试剂五,可将测试管对着灯光,观察有无
    结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊,请将每只测试管放到 37ºC
    水浴锅中晃动 5 分钟,再比色。

    一-氧化氮合成酶(NOS)分型测定试剂盒

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