大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒

实验原理：
大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记 的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终 的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。

产品名称	英文名称	规格
大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒	Rat Protein Kinase B,PKB/Akt ELISA Kit	48T/96T

操作步骤：
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)阴性 阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)阳性。
公司正在出售的产品：
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人胰腺导管癌细胞;CFPAC-1	人胚肾上皮细胞系;KiMA 人直肠粘膜上皮细胞完全培养基 100mL
0脂酶A2激活蛋白抗体	中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO Hu 164 SCF 17
黄热病毒包膜糖蛋白抗体	小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞;SH3
整合素α4β7抗体	IL18BP Others Human 人 IL18BPa 人细胞裂解液 (阳性对照)
肿瘤标志物CYFRA21-1抗体	IL11RA Others Canine 狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人细胞裂解液 (阳性对照)
黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗体	EB病毒转化的绒猴淋巴细胞;B95-8 膀胱癌细胞，J82细胞 GBC-SD(胆囊癌细胞)
周期素D2抗体	HPAEC Pellet 人肺动脉内皮细胞团块 > 1 mio.cells 心肌细胞生长添加物CMGS
G蛋白激活内向钾通道3抗体	TNFRSF17 Others Mouse 小鼠 TNFRSF17 人细胞裂解液 (阳性对照)
酸化肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体	MCF-7(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人细胞裂解液 (阳性对照)
神经肽S抗体	CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人细胞裂解液 (阳性对照)
短链脱氢还原酶13抗体	HA Others H12N1 甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照)
肝癌相关抗原hca25a	大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒CL-0435SF126(人脑瘤细胞)5×106cells/瓶×2
间隙连接蛋白43抗体	人颅骨造骨细胞 (HCO) ( 5×105 )
Kelch样蛋白8抗体	猫肾细胞;CRFK
21号染色体开放阅读框91抗体	ERBB2 Others Mouse 小鼠 HER2 / ErbB2 人细胞裂解液 (阳性对照)

标本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
样品收集、处理及保存方法：
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。