- ￥500
- Elabscience
- 31.25~2000 pg/mL
- E-EL-P0010c
- 中国
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
北京百奥创新科技有限公司
- 库存：
大量
- 样本：
血清，血浆或其他生物体液
- 应用：
体外定量检测Porcine 中TNF-α浓度
- 检测方法：
Colormetric
- 检测范围：
31.25~2000 pg/mL
- 规格：
48T；96T；96T*5
用途：该试剂盒用于体外定量检测Porcine 中TNF-α浓度
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗猪TNF-α抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的猪TNF-α会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗猪TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗猪TNF-α抗体与结合在包被抗体上的猪TNF-α结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，TNF-α浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中TNF-α的浓度。
| 反应类型 | 夹心法 |
| 规格 | 96T |
| 反应时间 | 4.5h |
| 反应性 | Porcine |
| 检测方法 | Colormetric |
| 检测范围 | 31.25—2000 pg/mL |
| 灵敏度 | 18.75 pg/mL |
| 样本体积 | 100μL |
| 样本类型 |
特异性：可检测样本中的猪TNF-α，且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
重复性：板内，板间变异系数均<10%。
典型数据
由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
| (pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|---|---|---|
| 2000 | 2.383 2.393 |
2.388 | 2.309 |
| 1000 | 1.677 1.695 |
1.686 | 1.607 |
| 500 | 0.941 0.937 |
0.939 | 0.86 |
| 250 | 0.533 0.541 |
0.537 | 0.458 |
| 125 | 0.277 0.253 |
0.265 | 0.186 |
| 62.5 | 0.185 0.177 |
0.181 | 0.102 |
| 31.25 | 0.123 0.139 |
0.131 | 0.052 |
| 0 | 0.07 0.088 |
0.079 | -- |
 |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Mean (pg/mL) |
92.68 | 184.99 | 768.41 | 87.57 | 181.59 | 820.00 |
| Standard deviation |
5.57 | 9.23 | 27.43 | 4.52 | 7.43 | 38.54 |
| C V (%) | 6.01 | 4.99 | 3.57 | 5.16 | 4.09 | 4.70 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|---|---|
| Serum (n=8) | 96-108 | 101 |
| EDTA plasma (n=8) | 86-98 | 91 |
| Cell culture media (n=8) | 84-96 | 90 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
|---|---|---|---|---|
| 1:2 | Range (%) | 92-107 | 91-106 | 98-113 |
| Average (%) | 100 | 98 | 104 | |
| 1:4 | Range (%) | 91-102 | 80-92 | 84-95 |
| Average (%) | 96 | 85 | 90 | |
| 1:8 | Range (%) | 93-107 | 85-99 | 89-100 |
| Average (%) | 99 | 90 | 94 | |
| 1:16 | Range (%) | 93-108 | 80-92 | 83-96 |
| Average (%) | 100 | 87 | 89 |
试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
| 中文名称 | 英文名称 | 规格 | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| ELISA酶标板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8 孔×12 条 | -20℃，可存放6个月 |
| 冻干标准品 | Reference Standard | 2 支 | |
| 浓缩生物素化抗体(100×) | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120 μL | |
| 浓缩HRP酶结合物(100×) | Concentrated HRP Conjugate | 1支 120 μL | -20℃(避光)，可存放6个月 |
| 标准品&样品稀释液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20 mL | 2-8℃.可存放6个月 |
| 生物素化抗体稀释液 | Biotinylated Detection Ab Diluent | 1瓶 14 mL | |
| 酶结合物稀释液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 14 mL | |
| 浓缩洗涤液(25×) | Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30 mL | |
| 底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10 mL | 2-8℃(避光) |
| 反应终止液 | Stop Solution | 1瓶 10 mL | 2-8℃ |
| 封板覆膜 | Plate Sealer | 5 张 | |
| 产品说明书 | Product Description | 1 份 | |
| 质检报告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
试验所需自备物品
- 1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
- 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
- 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
- 4. 吸水纸
操作步骤
 |
1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本，37℃孵育90分钟 |
 |
2. 弃掉板内液体后，立即加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟 |
 |
3. 弃掉板内液体，洗板3次 |
 |
4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次 |
 |
5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右 |
 |
6. 每孔加入50μL终止液 |
 |
7. 立即在450nm波长下读数，处理数据 |
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文献和实验
