- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM1057755
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃
- 保质期：
90天
- 英文名：
pCMV-UB-K63×His-Neo
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pCMV-UB-K63×His-Neo
货号：KM1057755
图谱：微客服
宿主：哺乳细胞
用途：基因表达
片段类型：ORF
片段物种：人
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光标记：
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文献和实验胚胎中细胞基因打靶方法 置换型设计物的制备 1． 选择靶基因的一个部分作为设计物的组成，还包括有靶基因的另一个部分作为 Southern 杂交探针，以鉴定细胞中是否已发生同源重组之用。 2． 在质粒载体中构建一个克隆； neo 基因能阻断靶基因的表达，在 neo 的两侧保持保留同源区；在同源区外的置换型设计物中包含一个胸腺嘧啶激酶（ TK ）基因。 3． 用限制性内切酶消化设计物 DNA 使成线形；设计
和PSV2-neo质粒载体DNA 用TE配制成40mg/L的DNA 溶液，同时向供体细胞DNA 液200μl中加入带基因neo质粒DNA 液(20mg/L)220μl和2×HBS 250μl(PSV2-neo为1～2mg/L的使用量)。②取500μl上述DNA 溶液加入硅化试管中，缓慢加入3.1ml、2mol/L CaCl2 混匀30秒。③然后立即混旋，室温下静置30分钟，待溶液轻度混浊后，吹打后即用于转染受体细胞。(4)转染受体细胞①将处于对数生长期已占瓶底50～70%的受体细胞，在转染前4小时更换
，37℃、5%CO2培养，待细胞占50～70%瓶底面积时，用于转染试验。 (3)DNA-磷酸钙沉淀物的制备 ①将供体细胞DNA和PSV2-neo质粒载体DNA用TE配制成40mg/L的DNA溶液，同时向供体细胞DNA液200μl中加入带基因neo质粒DNA液(20mg/L)220μl和2×HBS 250μl(PSV2-neo为1～2mg/L的使用量)。 ②取500μl上述DNA溶液加入硅化试管中，缓慢加入3.1ml、2mol/L CaCl2混匀30秒。 ③然后立即混旋，室温下静置30
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