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北京百奥创新科技有限公司
大量
血清,血浆或其他生物体液
体外定量检测Rat 血清,血浆或其他生物体液中IL-1β浓度
Colormetric
31.25~2000 pg/mL
48T;96T;96T*5
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠IL-1β抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的大鼠IL-1β会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠IL-1β抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠IL-1β抗体与结合在包被抗体上的大鼠IL-1β结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,IL-1β浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中IL-1β的浓度。
反应类型 | 夹心法 |
规格 | 96T |
反应时间 | 3.5h |
反应性 | Rat |
检测方法 | Colormetric |
检测范围 | 31.25—2000 pg/mL |
灵敏度 | 18.75 pg/mL |
样本体积 | 100μL |
样本类型 | 血清,血浆或其他生物体液 |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
---|---|---|---|
2000 | 2.388 2.442 |
2.415 | 2.349 |
1000 | 1.602 1.622 |
1.612 | 1.546 |
500 | 0.956 0.941 |
0.949 | 0.883 |
250 | 0.494 0.53 |
0.512 | 0.446 |
125 | 0.266 0.242 |
0.254 | 0.188 |
62.5 | 0.169 0.163 |
0.166 | 0.1 |
31.25 | 0.114 0.122 |
0.118 | 0.052 |
0 | 0.06 0.071 |
0.066 | -- |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (pg/mL) |
100.50 | 314.20 | 880.10 | 107.40 | 340.60 | 954.80 |
Standard deviation |
5.70 | 13.50 | 30.80 | 5.60 | 20.40 | 33.40 |
C V (%) | 5.67 | 4.30 | 3.50 | 5.21 | 5.99 | 3.50 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 85-98 | 91 |
EDTA plasma (n=8) | 86-100 | 93 |
Cell culture media (n=8) | 86-101 | 92 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 86-100 | 86-96 | 100-116 |
Average (%) | 92 | 91 | 106 | |
1:4 | Range (%) | 95-105 | 84-96 | 94-106 |
Average (%) | 100 | 91 | 100 | |
1:8 | Range (%) | 101-114 | 81-91 | 96-112 |
Average (%) | 108 | 86 | 103 | |
1:16 | Range (%) | 96-108 | 83-97 | 92-106 |
Average (%) | 102 | 89 | 99 |
未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
中文名称 | 英文名称 | 规格 | 保存条件 |
---|---|---|---|
ELISA酶标板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8 孔×12 条 | -20℃,可存放6个月 |
冻干标准品 | Reference Standard | 2 支 | |
浓缩生物素化抗体(100×) | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120 μL | |
浓缩HRP酶结合物(100×) | Concentrated HRP Conjugate | 1支 120 μL | -20℃(避光),可存放6个月 |
标准品&样品稀释液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20 mL | 2-8℃.可存放6个月 |
生物素化抗体稀释液 | Biotinylated Detection Ab Diluent | 1瓶 14 mL | |
酶结合物稀释液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 14 mL | |
浓缩洗涤液(25×) | Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30 mL | |
底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10 mL | 2-8℃(避光) |
反应终止液 | Stop Solution | 1瓶 10 mL | 2-8℃ |
封板覆膜 | Plate Sealer | 5 张 | |
产品说明书 | Product Description | 1 份 | |
质检报告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
说明:所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出。
1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本,37℃孵育90分钟 |
|
2. 弃掉板内液体后,立即加入100μL生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟 |
|
3. 弃掉板内液体,洗板3次 |
|
4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液,37℃孵育30分钟,弃掉板内液体,洗板5次 |
|
5. 每孔加入90μL底物溶液,37℃孵育15分钟左右 |
|
6. 每孔加入50μL终止液 |
|
7. 立即在450nm波长下读数,处理数据 |
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