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碧云天生产的Ki67细胞增殖检测试剂盒(免疫荧光法, 绿色, 鼠单抗),英文名为Ki67 Cell Proliferation Assay Kit (IF, Green, Mouse mAb),即Ki67 Cell Proliferation Assay Kit (Immunofluorescence, Green, Mouse Monoclonal Antibody),是通过免疫荧光染色检测细胞增殖标记物Ki67的表达水平以确认细胞是否处于增殖状态的检测试剂盒[1]。本试剂盒中的Ki67鼠单抗可以识别人、小鼠或大鼠的Ki67,因此本试剂盒可以通过荧光显微镜或高内涵筛选(High content screening, HCS)等检测人、小鼠或大鼠等细胞或组织样品中的增殖情况。
本试剂盒提供了固定液、洗涤液、封闭液、一抗、荧光标记二抗、细胞核染色液、封片液,使用时不必再配制其它任何溶液。使用本试剂盒检测HeLa细胞增殖的效果请参考图1。
图1.碧云天Ki67细胞增殖检测试剂盒(免疫荧光法, 绿色, 鼠单抗) (C2317S)检测HeLa细胞增殖的效果图。实际染色效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
本试剂盒中提供的封闭液为碧云天的QuickBlock™免疫染色封闭液(P0260),仅10分钟左右即可完成封闭。
使用本试剂盒染色后Ki67呈绿色荧光,其最大激发波长为495nm,最大发射波长为519nm;细胞核呈蓝色荧光,其最大激发波长为364nm,最大发射波长为454nm。
Ki67是一种与增殖相关的核蛋白,由MKI-67基因编码,又称为MKI-67。Ki67主要分布在分裂间期的核仁皮层,并在有丝分裂期间被募集到浓缩的染色体中[2,3],通常只在增殖细胞中表达[4]。其表达在不同的细胞周期阶段有所不同,在G1期至有丝分裂时升高,有丝分裂后立即迅速降低;存在于G1期、S期、G2期和有丝分裂期的细胞核中,而G0期静止细胞的细胞核中不表达[5,6]。因此,Ki67的表达水平可以有效反映细胞的增殖状态。Ki67在癌细胞中高表达,并被认为是肿瘤标志物[7]。在恶性疾病的回顾性研究中,Ki67作为一种潜在的预后标志物被广泛研究。越来越多的临床研究表明,Ki67是一种癌症诊断的重要指标。
本系列产品包括Ki67兔单抗和小鼠单抗两类抗体,同时提供绿色和红色两种荧光二抗,以满足不同的染色和应用需求,具体见相关产品。
如果检测96孔板内的样品,本试剂盒可以检测100-500个样品(抗体重复使用0-4次);如果用于检测6孔板内的样品,通常可以检测25-50个样品(抗体重复使用4-9次);如果检测组织切片至少可以检测50个样品。
包装清单:| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C2317S-1 | 固定液 | 50ml |
| C2317S-2 | 洗涤液 | 250ml×2 |
| C2317S-3 | 免疫荧光染色封闭液 | 50ml |
| C2317S-4 | Ki67鼠单抗 | 5ml |
| C2317S-5 | 抗鼠488 | 5ml |
| C2317S-6 | 细胞核染色液(DAPI) | 50ml |
| C2317S-7 | 抗荧光淬灭封片液 | 10ml |
| — | 说明书 | 1份 |
固定液、细胞核染色液(DAPI) -20ºC保存,其余试剂均4ºC保存,半年有效。其中抗鼠488和细胞核染色液(DAPI)须避光保存。
注意事项:固定液对人体有害,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
免疫荧光染色时,请注意回收使用过的Ki67鼠单抗和抗鼠488。回收后通常至少可以重复使用5次,如果出现浑浊、沉淀等异常现象,应停止使用。
每次使用洗涤液洗涤时须尽量吸尽残余液体,同时要保持样品表面有些湿润,不能干掉,最后一次洗涤完时吸尽洗涤液。
需使用可以观察绿色荧光和蓝色荧光的荧光显微镜或高内涵分析仪。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验免疫荧光法 immunofluorescence method
将荧光素及蕊香红等荧光色素同抗原或抗体结合,然后使与组织切片或细胞涂片标本中各个相对应的抗体或抗原结合,用荧光显微镜检查其定位的方法。由于此法是孔斯(A. H. Coons)和卡普兰( M. H. Kaplan, 1950)所创用的。因此又称为孔斯法( Co-on’ s method)。免疫荧光法有直接法和间接法( sa-ndwich法)。直接法依靠荧光抗体与抗原或荧光抗原同抗体的结合;与此相反,间接法首先使抗原(抗体)结合相对应的抗体(抗原),然后让那种抗体(抗原)与相对应的荧光抗原
在免疫荧光染色过程中单染和共染是常用的两种方式,除此之外我们还可能会用到远红外进行染色标记。这相对于前两者实验操作上处理方法是一致的,唯独在样品处理上有所不同,而导致荧光定位标记的颜色增多,相对而言变得复杂。免疫荧光技术主要是通过抗体与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。那么接下来,我们重点来介绍免疫荧光操作方法以及注意事项。操作步骤:1. 首先,在常温下将组织切片用免疫组化笔进行画圈,接着加入 0.1M PB 约 50 微升左右,进行每次 20 分钟的漂洗,漂洗
基本原理将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4荧光标记的抗体溶液:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH
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