- ￥3490
- gelatins
- JC-E4497
- 国内
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株RT-PCR试剂盒
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
避光/低温保存
- 规格：
50次
产品及特点：
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
6. 本产品由江蓝纯生物提供，不得用于临床诊断。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL（橘黄盖） |
| 试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL（红盖) |
| 试剂三 | 超纯水 | 1 mL（亮黄盖） |
| 试剂四 | 猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株RT-PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂五 | 猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株RT-PCR阳性对照（1×10E8 /μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂：
样品 RNA。
猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株RT-PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 RNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）：
3.如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳
性对照，另一个是RT-PCR 阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：
| 成份 | N+2 个 样品管 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性对照 |
| 5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
| 猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株RT-PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2μL | 2μL |
| N+2个制备的 RNA 样品 | 各 12.5μL | -- | -- |
| 超纯水 | -- | 12.5μL | -- |
| 猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC30株RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液 | -- | -- | 12.5μL |
| MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 42℃ | 30 min |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR反应(35个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 58℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 20 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
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文献和实验，其中规定了确诊病例的诊断方法：具有急性发烧呼吸道疾病的临床症状并且经实时荧光定量PCR （real-time RT-PCR）或病毒分离培养 （viral culture）实验室检测方法检验证实感染A（H1N1）型猪流感病毒。卫生部办公厅于4月30日印发了《人感染猪流感预防控制技术指南（试行）》的通知》[7],其中在实验室检测和病例诊断报告章节，内容如下：检测程序呼吸道标本应首先应用real time RT-PCR方法检测A型流感病毒的M基因、Swine（ H1N1）的HA基因和NP基因，以及质控对照
，中间有褐色蝶形斑。卵鞘内含卵16粒。亦为我国广布优势种。多见于厨房、贮物间和卫生间等处。 此外还澳洲大蠊（P．australasiae）、黑胸大蠊（P．fuliginosa）和东方蜚蠊（Blatta orientalis）。 与疾病的关系 蜚蠊能通过体表或体内（以肠道为主）携带多种病原体而机械性地传播疾病。近年来，国内报告从蜚蠊体内分离到疾病杆菌5株，沙门氏副伤寒甲、乙菌5株，绿脓杆菌43株，变形杆菌8株，青霉、黄曲霉等多种霉菌，腺病毒60株，肠道病毒血清型15株，脊髓灰质炎病毒
中的病毒能抗强酸强碱。病毒可用猪原代肾细胞或传代细胞培养并产生病变。接种乳鼠弱毒疫苗、组织培养弱毒疫苗、水疱皮和疱液灭活疫苗能控制本病的流行。 猪脑脊髓炎病毒（PEV） 有两个亚型，捷克猪捷申病病毒和英国猪太法病病毒。除美洲和亚洲外，世界许多国家都已发现。主要病变为中枢神经灰质坏死，病死率90～100％。灭活疫苗有一定效果，但未能完全控制此病。 鸡脑脊髓炎病毒（AEV） 单一血清型。自然病毒株均有嗜肠性，鸡胚适应的Van Roekel株有高度嗜神经性。经粪便和蛋传播
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