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规定储存条件下12个月 。
爱必信(上海)生物科技有限公司
规定储存条件下12个月 。
100T×4
概述 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
描述 | 宿主细胞残留DNA可能会传递肿瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性,各国药品监督管理机构都对其残留量有着严格的限度控制,我国药监局于2022年5月试行的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则(试行)》中明确指出“要对DNA残留量和残留片段的大小进行控制,建议尽量将残留 DNA 控制在10ng/剂内,DNA 残留片段的大小控制在 200bp以内“。各国药典也陆续提供数种关于宿主细胞残留DNA检测经典的方法,目前以实时定量聚合酶链式反应(qPCR)方法较好。 爱必信的多款残留DNA片段分析试剂盒能快速、特异地检测多种宿主细胞(Human,Hela,293系列的HEK293、293T等)DNA残留片段大小分布。片段分布区间包括:<100bp,100~200bp,200~500bp,>500bp。该试剂盒配套我公司宿主残留DNA样本前处理试剂盒使用。 本试剂盒利用TaqMan荧光探针原理,设计了四种不同的扩增片段(94bp,153bp,232bp,526bp)来定量检测分析样品中Hela细胞残留DNA片段含量情况。检测快速,专一性强,最低检测限可以达到fg水平。 试剂盒配套有HelaDNA定量参考品可准确定量Hela残留DNA片段含量。试剂盒的检测范围为:0.03pg/μL~300pg/μL。 产品特点: 稳定性高:受环境影响较小,保质期内性能稳定; 精密度高:低浓度重复性CV值<20%;中高浓度重复性CV值<15%; 专属性强:不受CHO E.coli 的外源DNA干扰; 快速便捷:qPCR 1小时即可出结果。 |
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产品组成 |
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用途说明 | Hela细胞残留DNA片段检测试剂盒用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中Hela细胞残留DNA片段含量的专用试剂盒。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
使用方法 | 一、试验所需自备器材: 荧光定量PCR仪 1.5mL无菌低吸附离心管 无菌无酶八联管或96孔qPCR板 1000μL,100μL,10μL移液枪 1000μL,100μL,10μL无菌低吸附带滤芯吸头 二、适配机型(包括但不限于): LightCycler480Real-TimePCRSystem ABI7500Real-TimePCRSystem Bio-RadCFXOpus96Real-TimePCRSystem 三、试验流程: 1、Hela DNA定量参考品的稀释和标准曲线的制备 用试剂盒提供的DNA稀释液将Hela DNA定量参考品(30ng/μL)进行梯度稀释,稀释浓度依次为3000pg/μL,300pg/μL,30pg/μL,3pg/μL,0.3pg/μL,0.03pg/μL。具体步骤如下: (1)将试剂盒中的Hela DNA定量参考品和DNA稀释液置于冰上或2-8℃条件下融化。待完全融化后,轻微振荡混匀,短时间快速离心3~5s,如此重复3次。 (2)取6支干净的1.5mL离心管,分别标记为ST0,ST1,ST2,ST3,ST4,ST5。 (3)在ST0管中用DNA稀释液将DNA定量参考品稀释至3000pg/μL,轻微振荡混匀,短时间快速离心3~5s,如此重复3次,确保DNA定量参考品与DNA稀释液充分混匀,使用时避免反复冻融。 (4)在ST1,ST2,ST3,ST4,ST5管中分别加入180μLDNA稀释液,再进行梯度稀释,稀释方式如表2所示: 表2 Hela DNA定量参考品的稀释
2、qPCR反应液的制备和加样 注:片段试剂盒中含有四种不同长度的扩增片段,在建立标曲时,需分别对不同的扩增片段设置标曲,并根据对应扩增片段的标曲来计算其残留量。 (1)根据所需检测的参考品和待测样品数量(一般做3组复孔),分别计算各片段反应所需孔数: 反应孔数=(参考品ST1-5+1个无模板对照NTC+待测样品)×3 (2)根据反应孔数计算各片段本次所需的Hela qPCRMIX总量: Hela qPCRMIX=(反应孔数+2或3)×20μL(2或3为操作损失量) (3)将所用试剂置于冰上融化,轻微振荡混匀,按表3、4、5、6所示配制对应扩增片段Hela qPCRMIX。
(4)将所需试剂置于冰上融化,轻微振荡混匀,按表7、8、9、10所示加样:
表11表示的是检测各浓度梯度的DNA标准曲线、1个无模板对照NTC。每个检测做3个重复孔。其中1~3列为MIX-94bp,4~6列为MIX-153bp,7~9列为MIX-232bp,10~12列为MIX-526bp。 表 11 96 孔板排版 示例
(5)试验可使用无菌无核酸酶的八联管或者96孔板进行反应,需去除反应体系中的气泡,并离心至管底准备反应。
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性能 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
储存/保存方法 | 规定储存条件下12个月 。 |
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注意事项 | 1、本试剂盒已通过稳定性(冻融等因素)的验证,无需分装。 2、阴性样品(2×qPCRReactionMIX、HEK293Primer&ProbeMIX和DNA稀释液等)和阳性样品(参考品和待测样品等)的配制环境需区分区域,不可在一个区域内操作,配制人员需穿戴整齐,戴好口罩、手套和穿好洁净服。 3、注意在不同加样步骤间及时更换吸头,避免交叉污染,避免长时开盖。 4、试剂盒必须在有效期内使用。 5、试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用。 6、只有严格遵守说明书的操作方法,全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。 7、最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。 8、公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。 |
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