CloneUFO® Multi One Step Cloning 作为新一代的重组克隆试剂盒,专门针对多片段重组反应进行优化,可以一次实现多至五个插入片段的顺序拼接克隆。该试剂盒独特的非连接酶依赖体系,极大地降低了载体自连背景,且无需考虑插入片段自身携带的酶切位点;高度优化的反应缓冲液及增强的重组酶 UvsXase Multi,可显著提高克隆的重组效率与对杂质的耐受度,使得线性化载体与插入片段不进行纯化直接用于重组克隆成为可能,极大的简化了实验步骤。
基本步骤:将载体在克隆位点进行全质粒扩增,得到线性化载体;设计同源引物,使得目的片段 PCR 产物的 5’和 3’末端分别带有和预插入的线性化载体前后两末端完全一致的序列 (15 bp ~ 20 bp);将扩增好的目的基因 PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后,在 UvsXase 的催化下,仅需反应 30 min 即可进行转化,完成定向克隆。克隆阳性率可达 95%以上。