M3501 麦格 磷钨酸水合物

【共享】 蛋白质含量测定法/蛋白质沉淀法/Western免疫印迹

各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸 用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正 Folin－酚试剂法（Lowry法） 灵敏度高～5mg 慢速 40～60分钟 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇 耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高1～5mg 快速5～15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS 最好的方法；干扰

各种染色方法大荟萃

） （4）0.2% 氯化金调色数秒 （5）丽春红淡染 （6）水速洗 （7）烘干，透明，封片。 3、结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。 【M】Mallory 三色法 1、步骤 （1）切片脱蜡至水 （2）0.5% 酸性复红水溶液 1 min （3）蒸馏水洗 （4）入下液 1-2 min 苯胺蓝 0.5 g，桔黄 G 2 g，磷目酸或磷钨酸 1 g，蒸馏水 100 ml。 （5）蒸馏水洗 （6）95% 乙醇分色

【转帖】Western blot的原理、操作及注意事项

液，如Tris、Good缓冲液等。可用沉淀法除去干扰物，即用等体积10%冷的三氯醋酸沉淀蛋白质，然后弃去上清液，再用已知体积的1m NaOH溶解沉淀的蛋白质进行定量测定。 2.Lowry法： 此法是双缩脲法的进一步发展。他的第一步就是双缩脲反应，即Cu++与蛋白质在碱性溶液中形成络合物，然后这个络合物还原磷钼磷-磷钨酸试剂（福林-酚试剂），结果得到深蓝色物。此法比双缩脲法灵敏得多，适合于测定20mg/L～400mg/L含量的蛋白质溶液。其干扰物质与双缩脲法相同，而且受他们的影响更大，硫醇和许多其他物质