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文献和实验,构成基本名称.该种中发现的不同的酶按照顺序编号I, II, III等.如存在变种和品系,取变种或品系的一个字母.若酶存在于质粒上,则需大写字母表示非染色体遗传因子. 如,HindIII从Haemophilus Influenzue d株中分离的第三个酶.EcoRI表示基因位于Escherichia coli中的抗药性R质粒上. (三)II类限制性内切酶的底物识别顺序及切割位点 绝大多数的II类限制性内切酶在底物DNA上的识别顺序长度为4,5,6碱基
与分子量的对数成反比。要准确地确定DNA片段的大小,必须用分子量标准物同时进行电泳对照。常用的分子量标准是lDNA/EcoRI、lDNA/HindIII、lDNA/EcoRI+HindIII的酶切片段 实验材料和试剂 (一)实验材料 实验二提取的质粒 pUC118 (二)试剂 1.限制性内切酶 BamHI 2.l DNA/HindIII分子量标准 3.双蒸馏无菌水
+HindIII对质粒DNA进行双酶切,以便进行某基因的克隆。 那么,我们建议,同时设计并进行三种酶切反应: A: EcoRI+HindIII 双酶切 B: EcoRI单酶切 C: HindIII单酶切 在酶切时,ABC三种酶切反应都用相同的buffer系统,相同的DNA量(建议至少0.5ug), 所需的酶量用DDDesigner进行计算。在合适的温度(37度)酶切1-2个小时, 然后进行电泳分析。电泳分析时,添加两种对照:D:未酶切的质粒DNA和分子量标准
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