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细胞周期检测试剂盒-PI/RNase Staining
上海辅泽商贸有限公司
0-5度
C543/50tests/C549/50 tests/C548/50 tests/MT15/20μl/MT15/20μl*3/MT10/400 μl/MT11/400 μl/MT12/400 μl/G272/50tests /G270/50tests/UP01/1 set/UP02/1 set/UP03/1 set/G264/50tests/G264/200 tests/L256/50tests/L256/200tests/K261/100tests/EX10/3tests/EX11/10 pieces/EX01/5 samples/EX02/5 samples/EX03/5 samples/EX04/5 samples/EX05/5 samples/EX06/5 samples/D678/100tests/D678/500tests/S311/100tests/M496/100tests/R253/100tests/R252/100tests/G263/100tests/T419/100tests/D029/1g/P016/1g/P017/1g/DK02/20 samples/D350/10mg/L248/50μg/L248/50μg*5/M466/5μg*3/F374/1tube/F374/3tubes/I291/50tests/M489/50μg*2/G268/1set/G269/1set/B568/50mg/D048/1ml/T511/5g/N390/10 mg/N415/25 mg/C348/10 mg/D418/10 mg/D465/100mg/H357/1ml/SB12/20 Sample
规格: | C543/50tests | 产品价格: | ¥590.0 |
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规格: | C549/50 tests | 产品价格: | ¥1350.0 |
规格: | C548/50 tests | 产品价格: | ¥1350.0 |
规格: | MT15/20μl | 产品价格: | ¥920.0 |
规格: | MT15/20μl*3 | 产品价格: | ¥2040.0 |
规格: | MT10/400 μl | 产品价格: | ¥1320.0 |
规格: | MT11/400 μl | 产品价格: | ¥1320.0 |
规格: | MT12/400 μl | 产品价格: | ¥1320.0 |
规格: | G272/50tests | 产品价格: | ¥3380.0 |
规格: | G270/50tests | 产品价格: | ¥5360.0 |
规格: | UP01/1 set | 产品价格: | ¥4180.0 |
规格: | UP02/1 set | 产品价格: | ¥4180.0 |
规格: | UP03/1 set | 产品价格: | ¥4180.0 |
规格: | G264/50tests | 产品价格: | ¥2000.0 |
规格: | G264/200 tests | 产品价格: | ¥4220.0 |
规格: | L256/50tests | 产品价格: | ¥2180.0 |
规格: | L256/200tests | 产品价格: | ¥6980.0 |
规格: | K261/100tests | 产品价格: | ¥5460.0 |
规格: | EX10/3tests | 产品价格: | ¥8790.0 |
规格: | EX11/10 pieces | 产品价格: | ¥9040.0 |
规格: | EX01/5 samples | 产品价格: | ¥2420.0 |
规格: | EX02/5 samples | 产品价格: | ¥2420.0 |
规格: | EX03/5 samples | 产品价格: | ¥2420.0 |
规格: | EX04/5 samples | 产品价格: | ¥2080.0 |
规格: | EX05/5 samples | 产品价格: | ¥2080.0 |
规格: | EX06/5 samples | 产品价格: | ¥2080.0 |
规格: | D678/100tests | 产品价格: | ¥700.0 |
规格: | D678/500tests | 产品价格: | ¥2080.0 |
规格: | S311/100tests | 产品价格: | ¥610.0 |
规格: | M496/100tests | 产品价格: | ¥990.0 |
规格: | R253/100tests | 产品价格: | ¥1460.0 |
规格: | R252/100tests | 产品价格: | ¥930.0 |
规格: | G263/100tests | 产品价格: | ¥2040.0 |
规格: | T419/100tests | 产品价格: | ¥2680.0 |
规格: | D029/1g | 产品价格: | ¥650.0 |
规格: | P016/1g | 产品价格: | ¥2140.0 |
规格: | P017/1g | 产品价格: | ¥2140.0 |
规格: | DK02/20 samples | 产品价格: | ¥3840.0 |
规格: | D350/10mg | 产品价格: | ¥1620.0 |
规格: | L248/50μg | 产品价格: | ¥880.0 |
规格: | L248/50μg*5 | 产品价格: | ¥2720.0 |
规格: | M466/5μg*3 | 产品价格: | ¥2230.0 |
规格: | F374/1tube | 产品价格: | ¥1670.0 |
规格: | F374/3tubes | 产品价格: | ¥3790.0 |
规格: | I291/50tests | 产品价格: | ¥2080.0 |
规格: | M489/50μg*2 | 产品价格: | ¥2940.0 |
规格: | G268/1set | 产品价格: | ¥6370.0 |
规格: | G269/1set | 产品价格: | ¥5780.0 |
规格: | B568/50mg | 产品价格: | ¥3890.0 |
规格: | D048/1ml | 产品价格: | ¥2360.0 |
规格: | T511/5g | 产品价格: | ¥1130.0 |
规格: | N390/10 mg | 产品价格: | ¥1180.0 |
规格: | N415/25 mg | 产品价格: | ¥1950.0 |
规格: | C348/10 mg | 产品价格: | ¥1440.0 |
规格: | D418/10 mg | 产品价格: | ¥800.0 |
规格: | D465/100mg | 产品价格: | ¥1380.0 |
规格: | H357/1ml | 产品价格: | ¥1670.0 |
规格: | SB12/20 Sample | 产品价格: | ¥4230.0 |
细胞周期检测试剂盒-PI/RNase Staining货号:C543
细胞周期检测试剂盒
Cell Cycle Assay Kit - PI/RNase Staining
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温
特点:
·日本原装进口试剂盒
·固定和不固定都可使用
试剂盒内含
产品概述
DNA含量分析在流式细胞检测中,占有相当大的比例。通过这种方法,研究者可以进行抗癌药物的毒性评估,并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中,DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定,可计算各细胞周期的百分率,也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。
Cell Cycle Assay Kit-PI/RNase Staining试剂盒,可快速完成细胞周期的分析,操作简便。本产品使用碘化丙啶 (PI) 作为DNA荧光染料,通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1,G2和S期细胞的比例。
所需的设备和材料
- 流式细胞仪(碘化丙啶PI:λex=535 nm,λem=617 nm)
- 37℃培养箱
- PBS缓冲液
- 1.5 ml微量管
- 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器
溶液制备
本产品在固定细胞及不细胞固定的情况下皆可使用。
配置Working solution (1 sample)
取500 μl Assay Buffer 后,分别加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。
*工作液易遇光分解,请在使用前立即配置并用铝箔纸包裹避光保存。
配置好的工作液1天内用完。
基本操作
非固定细胞
1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)。
2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中,在1,000×g离心3 min b)。
3. 去除上清液后加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000×g离心3 min。
4. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。
5. 在4℃避光培养30 min。
6. 涡旋振荡使细胞分散,在37℃避光培养30 min。
7. 涡旋振荡使细胞分散,用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块 c)。
8. 用流式细胞仪检测。
a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,用PBS洗涤并离心收集细胞。
b) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。
c) 样品处理后,剩余部分无法继续保存并使用。
固定细胞
1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)。
2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中,在1,000×g 离心3 min。
3. 去除上清,并在细胞团中加入1 ml的-20℃保存的70%乙醇。
4. 涡旋振荡使细胞分散,在4℃下静置2 h b)。
5. 在1,000×g 离心3 min后,去除乙醇 c)。
6. 加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000×g 离心3 min。
7. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。
8. 涡旋振荡使细胞分散,在37℃避光培养30 min。
9. 涡旋振荡使细胞分散,在4℃避光培养30 min。
10. 涡旋振荡使细胞分散,用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块 d)。
11. 用流式细胞仪检测。
a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,用PBS洗涤并离心收集细胞。
b) 根据不同的细胞种类,需适当调整固定时间。
c) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。
d) 样品处理后可以在4℃以下保存并继续使用,但是保存时间长短与细胞种类有关。
常见问题Q&A
Q1、C543用于分散细胞团聚的筛网的品牌、型号信息? |
A1:FALCON 5mL Polystyrene Round-Bottom Tube with Cell-Strainer Cap 型号:352235 |
Q2:实验需要在37度、4度环境中分别培养30min,这个先后顺序对实验结果有影响吗? |
A2:从做出的实验结果来看,没有影响。可以自由选择。 |
Q3:流式管作用是什么? |
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A3:检测时必须将细胞悬液放入流式管中,流式管的最上方有滤膜,这层滤膜的作用是把细胞打散,使其不团聚,也方便流式仪器吸取细胞的时候更容易) 特点: ·检测时间短 ·固定和不固定都可以用 ·悬浮细胞核贴壁细胞都可以用 产品概述 细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义 产品特性 产品特点:检测时间短 碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。 实验案例 对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期 用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。 示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化 阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09) 常见问题Q&A
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Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂 货号:C548
细胞周期检测试剂盒-深红色
Cell Cycle Assay Solution Deep Red
商品信息
储存条件:0-5 ℃
运输条件:常温
特点:
·检测时间短
·固定和不固定都可以
·悬浮细胞和贴壁细胞都可以
产品概述
细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义
产品特性
产品特点:检测时间短
碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。
实验案例
对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期
用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。
示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化
阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09)
常见问题Q&A
Q1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗? |
A1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以使用。 |
Q2:胰酶会影响检测吗? |
A2:如果实验中有胰酶残留,会影响检测; 如果回收细胞时使用胰酶,请确保按照方案进行清洁操作,去除残留胰酶。 |
Q3:需要固定细胞吗? |
A3:固定和不固定细胞都可以。 |
Q4:如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存? |
A4:都可以,本公司实际对比案例: 分别在保存固定细胞前后做了染色实验,检测结果没有差异 ・将固定细胞冷藏(4℃)后保存1周,根据使用说明书对细胞进行染色。 ・根据使用说明书对固定细胞进行染色,将细胞冷藏(4℃)后保存1周。 *冷冻保存细胞的话有可能会沉淀不溶物,所以不推荐冷冻保存。 |
Q5:用Cell Cycle Assiay Soluton染色后,为了除去过量的试剂可以清洗细胞吗? |
A5:不推荐染色后清洗细胞。 由于洗涤时的离心操作,有可能影响细胞周期解析的实验结果。 |
Q6:做流式检测时,应该注意哪些方面呢? |
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A6:流式检测时,需要在合适的条件下进行测检测。 以下列举了一些失败的案例。 1、检测通道选择不合适 例如一般的细胞周期检测都会使用PI(PE)通道,但是我们试剂盒选择PI通道并不能得到最适结果,请参照一下波段选择最适通道: 2、检测时电压过高(或过低)。 当流式检测时电压过高(或过低)时,都无法得到最适结果。 请通过直方图将G0/G1期、S期、G2/M期调整为清晰的测量电压。 3、细胞数量选择不合适 例如流式检测是圈门选择不恰当,会导致结果不好。 分析时请对选择所有细胞。 参考文献 1)細胞(HCAECs)
N. Sasaki, Y. Itakura and M. Toyoda, "Rapamycin promotes endothelial-mesenchymal transition during stress-induced premature senescence through the activation of autophagy”, Cell Commun. Signal, 2020, 18(1), 43 2)細胞(ARPE-19)
T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091. 3)細胞(MIA PaCa-2) N. Sasaki, F. Gomi, F. Hasegawa, K. Hirano, M. Fujiwara, M. Toyoda and T. Ishiwata, "Characterization of the metastatic potential of the floating cell component of MIA PaCa-2, a human pancreatic cancer cell line”, Biochem. biophys. res. commun, 2020, 522(4), 881-888. 4)細胞(人小气道上皮细胞) M. Komura, T. Sata, H. Yoshikawa, N. A. Nitta, Y. Suzuki, K KOike, Y. Kodama, K. Seyama and K. Takahashi, "Propylene glycol, a component of electronic cigarette liquid, damages epithelial cells in human small airways", 2022, Respir. Res., doi:10.1186/s12931-022-02142-2. 特点:
● 标记稳定性强、特异性高 ● 可用于免疫荧光共染色 规格性状 产品概述 线粒体不仅是细胞中产生能量的场所,也是与癌症、衰老、神经退行性疾病(例如,阿尔茨海默症、帕金森症)等密切相关的最重要的细胞器之一。 近年来,随着显微镜技术的发展,有关细胞器的研究正在由原来的“单独研究线粒体的机能””逐渐向“线粒体与其他细胞器之间的相互作用”的方向转移。因此,对于线粒体的更详细的形态观察需求越来越大。 MitoBright IM Red克服了其他染料的靶向标记稳定性差的问题,是一种可以用于免疫荧光共染色线粒体荧光探针。 实验例:与内质网标记物KDEL的共染色 用MitoBrightIM Red标记HeLa细胞的线粒体,经固定化和膜透性处理后再用内质网标记物KDEL的抗体进行免疫共染色。并且在左图的箭头所示范围内进行了荧光强度的检测。从荧光图像可以清晰的观察线粒体与附近的内质网的形态。 <检测条件> MitoBright IM Red (红) Ex: 561 nm, Em: 560-620 nm KDEL抗体-Alexa488 (绿) Ex: 488 nm, Em= 490-550 nm Scale bar: 10 μm MitoBright IM Red与其他试剂的不同 传统的小分子荧光染料在染色后的固定化操作或透膜剂处理后,往往会失去靶向性。而MitoBright IM Red与其他染料相比,提高了靶向稳定性,可以抑制免疫荧光实验时固定化操作造成的荧光强度减弱等问题。
・荧光强度差的比较 MitoBright IM与(T公司的)传统荧光染料相比,在活细胞线粒体染色后的固定化处理和透膜剂处理后的荧光强度如下图所示。固定化处理和透膜剂处理后,荧光强度都有一定的下降,但是MitoBright IM比传统染料的靶向标记稳定性更高,因此可以观察到更清晰的线粒体染色情况。
<检测条件> Ex=561 nm; Em= 560-620 nm
・荧光背景的比较 使用线粒体标记物TOM20抗体比较MitoBrightIM和传统试剂的免疫染色后的线粒体定位情况。 用MitoBrightIM和传统试剂对HeLa细胞进行染色,然后用TOM20抗体进行二抗免疫荧光染色。 结果显示, 用MitoBrightIM或现有试剂对HeLa细胞进行染色,然后用TOM20抗体进行二抗染色。 结果显示,传统试剂有扩散到线粒体以外区域的情况,导致背景很高,而MitoBrightIM的背景更低,而且定位与TOM20抗体一致。
<检测条件> Ex=561 nm; Em= 560-620 n 与传统试剂的对比 可检测的次数
荧光特性 激发波长(λex) : 548 nm
常见问题Q&A
MitoBright LT Green试剂 货号:MT10 线粒体长效荧光探针-绿色 MitoBright LT Green 商品信息 储存条件:-20度保存 运输条件:室温 特点: ● 荧光持续时间长 ● 可在含血清培养基中染色 ● 荧光显微镜、流式细胞仪均可检测 产品概述 细胞内有各种各样的细胞器,承担着各种各样必须的生命活动。其中线粒体不仅是通过氧化磷酸化反应生成ATP的场所,它还与癌症、细胞衰老、阿尔兹海默症、帕金森综合症等神经退行性疾病紧密相关,因此它是细胞内最重要的细胞器之一。 在对线粒体的形态和动态进行观察以及定量检测时,通常使用小分子荧光探针标记和荧光蛋白的基因转染两种方法。荧光蛋白的基因转染存在转染效率不稳定等情况,因此操作简便的小分子荧光探针的使用更为广泛。现在市面上销售的小分子荧光探针中,多为含有氯甲基的探针,该探针存在观察时间短,染色时不能使用含血清的培养基,染色后荧光背景高等问题。MitoBright LT荧光探针克服了这些问题,可在线粒体内稳定存在一天以上,条件合适的情况下可达到一周。而且与含有氯甲基的探针相比,染色后的荧光强度更高。本品直接采用DMSO溶液包装,可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有Green, Red, Deep Red等多种选择,可满足多重染色等各种各样的实验要求。 产品特点 1.可长时间在细胞内存在 用HBSS清洗HeLa细胞后,分别用MitoBright LT和其他公司的试剂进行染色,更换含血清的培养基,培养4天后观察线粒体染色情况。其他公司的染色试剂在4天后荧光强度大幅降低,而MitoBright LT依然维持着高荧光强度,并且在染色7日后依然可以观察到荧光。 <检测条件> MitoBright LT Green 、(T公司)Green:Ex 488 nm/Em 500–560 nm MitoBright LT Red 、(T公司)Red:Ex 561 nm/Em 560–620 nm MitoBright LT Deep Red 、(T公司)Deep Red:Ex 640 nm/Em 650–700 nm 2.可以使用含血清培养基 用MitoBright LT和其他公司试剂,分别用含有血清和不含血清的培养基染色。其他公司试剂在含有血清的培养基染色时,荧光明显减弱,而MitoBright LT在含有血清的培养基条件下,荧光没有减弱,可明显观察到线粒体的染色情况。 实验例
实时荧光观察 HeLa细胞用CCCP处理,并与线粒体检测试剂(Mtphagy Dye)和线粒体染色试剂(MitoBright LT Green)共同染色,并经过一段时间(6小时)后进行检测。 <检测条件> 设备:LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM) (Carl Zeiss, Oberkochen, Germany) 激发波长: MitoBright LT Green 488 nm Mtphagy Dye 555 nm 物镜:63x 拍摄时间:6小时 拍摄间隔:15秒 用流式细胞仪检测 1. 用RPMI培养基(10% Fetal Bovine Serum, 1% Penicillin-Streptomycin)配制Jurkat细胞悬液(3.2×105cell/ml)接种于5 cm培养皿中,在37℃,5% CO2培养箱内过夜培养。 2. 去除培养基,加入MitoBright LT Working Solution (0.1 μmol/l, 5 ml), 在37℃培养30分钟。 3. 去除溶液,用 5 ml的PRPMI培养基清洗细胞2 次。 4. 更换RPMI培养基,持续培养细胞,每隔2 天用流式细胞仪检测。 MitoBright LT Green MitoBright LT Red MitoBright LT Deep Red Excitation: 488 nm Excitation: 488 nm Excitation: 633 nm Emission: 515-545 nm Emission: 564-604 nm Emission: 650-670 nm 在胶原蛋白涂覆玻璃板上观察线粒体荧光成像 胶原蛋白涂覆玻璃板通常用于线粒体形态的高倍放大观察。 现有的线粒体染色试剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题,但是MitoBright LT系列可以在不受背景影响的情况下清楚地对线粒体进行染色。 <染色条件> 将HeLa细胞接种在胶原蛋白涂覆玻璃板上,培养24小时,提取上清液并用HBSS洗涤。 加入100 nmol/l的MitoBright LT Green工作溶液,培养30分钟后,提取上清液并用HBSS洗涤后用荧光显微镜观察。 <检测条件> Ex 488 nm,Em 500-560 nm <结果> 现有的线粒体染色剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题,但是MitoBright LT系列可以清晰地对线粒体染色,而不受背景影响。 通过超分辨率激光显微镜(STED)观察线粒体内部构造 线粒体疾病致突变的Cybrid细胞用MitoBright-LT-Deep Red染色,用超分辨激光显微镜(STED)观察,证实线粒体嵴结构异常。 <实验条件> 色素:MitoBrightLT Deep Red(100 nmol/l) 仪器:Leica超分辨率激光显微镜TCS SP8 STED 3X Ex. 640 nm / Em. 650-700 nm STED激光:775nm
<实验步骤> 1将细胞接种在玻璃培养皿中,培养2天(37℃,5% CO2)。 2去除培养基后,加入使用L-15培养基(含10%FBS)制备的MitoBrightLT Deep Red(100 nmol/l)工作液。 3孵育45分钟(37度,5% CO2)。 4去除上清液,用HBSS清洗两次。 5加入L-15培养基(含10%FBS),通过超分辨率激光显微镜(Leica TCS SP8 STED)进行观察。 以上数据由东京都老年学研究所衰老控制研究小组的大澤郁朗博士和藤田泰典博士友情提供。 产品文献 同仁化学研究所开发的线粒体长效染色荧光探针MitoBright LT系列在世界范围内广受科研人员的好评。在上市后的很短时间内,就出现了多篇使用MitoBright LT系列探针的论文,下面收集整理了部分的论文,其中红色字体标记的是使用本产品标记线粒体后,长时间(最长至5天)观察线粒体动态的报道,供感兴趣的科研人员参考。
荧光特性 MitoBright LT 染料的荧光特性 常见问题Q&A
规格性状 性状:本品是黄色液体 吸光度:0.600~0.800(490 nm附近) 线粒体长效荧光探针-红色 MitoBright LT Red 商品信息 储存条件:-20度保存,避光 运输条件:室温 特点: ● 荧光持续时间长 ● 可在含血清培养基中染色 ● 荧光显微镜、流式细胞仪均可检测 产品概述 细胞内有各种各样的细胞器,承担着各种各样必须的生命活动。其中线粒体不仅是通过氧化磷酸化反应生成ATP 的场所,它还与癌症、细胞衰老、阿尔兹海默症、帕金森综合症等神经退行性疾病紧密相关,因此它是细胞内最重要的细胞器之一。 在对线粒体的形态和动态进行观察以及定量检测时,通常使用小分子荧光探针标记和荧光蛋白的基因转染两种方法。荧光蛋白的基因转染存在转染效率不稳定等情况,因此操作简便的小分子荧光探针的使用更为广泛。现在市面上销售的小分子荧光探针中,多为含有氯甲基的探针,该探针存在观察时间短,染色时不能使用含血清的培养基,染色后荧光背景高等问题。MitoBright LT 荧光探针克服了这些问题,可在线粒体内稳定存在一天以上,条件合适的情况下可达到一周。而且与含有氯甲基的探针相比,染色后的荧光强度更高。本品直接采用DMSO 溶液包装,可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有Green, Red, Deep Red 等多种选择,可满足多重染色等各种各样的实验要求。 产品特点 1.可长时间在细胞内存在 用HBSS 清洗 HeLa 细胞后,分别用 MitoBright LT 和其他公司的试剂进行染色,更换含血清的培养 基,培养4天后观察线粒体染色情况。其他公司的染色试剂在4天后荧光强度大幅降低,而MitoBright LT 依然维持着高荧光强度,并且在染色7日后依然可以观察到荧光。 <检测条件> MitoBright LT Green 、(T 公司)Green:Ex:488 nm/Em:500–560 nm MitoBright LT Red 、(T 公司)Red:Ex:561 nm/Em:560–620 nm MitoBright LT Deep Red 、(T 公司)Deep Red:Ex:640 nm/Em:650–700 nm 2.可以使用含血清培养基 用MitoBright LT 和其他公司试剂,分别用含有血清和不含血清的培养基染色。其他公司试剂在含有血清的培养基染色时,荧光明显减弱,而 MitoBright LT 在含有血清的培养基条件下,荧光没有减弱,可明显观察到线粒体的染色情况。 3.荧光显微镜观察 HeLa细胞用CCCP处理,并与线粒体检测试剂(Mtphagy Dye)和线粒体染色试剂(MitoBright LT Green)共同染色,并经过一段时间(6小时)后进行检测。 <检测条件> 设备:LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM) (Carl Zeiss, Oberkochen, Germany) 激发波长: MitoBright LT Green 488 nm Mtphagy Dye 555 nm 物镜:63x 拍摄时间:6小时 拍摄间隔:15秒 实验例 用流式细胞仪检测 1. 用RPMI 培养基(10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)配制Jurkat 细胞悬液(3.2×105cell/ml)播种于5 cm 培养皿,37℃,5% CO2培养箱内培养一晚。 2. 去除培养基,加入MitoBright LT Working Solution (0.1 μmol/L,5 ml), 37℃培养30 分钟。 3. 去除溶液,用 5mL 的PRPMI 培养基清洗细胞2次。 4. 添加RPMI培养基,持续培养细胞,每隔2天用流式细胞仪检测。 在胶原蛋白涂覆玻璃板上观察线粒体荧光成像 胶原蛋白涂覆玻璃板通常用于线粒体形态的高倍放大观察。 现有的线粒体染色试剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题,但是MitoBright LT系列可以在不受背景影响的情况下清楚地对线粒体进行染色。 <染色条件> 将HeLa细胞接种在胶原蛋白涂覆玻璃板上,培养24小时,提取上清液并用HBSS洗涤。 加入100nmol / L的MitoBright LT Green工作溶液,培养30分钟后,提取上清液并用HBSS洗涤后用荧光显微镜观察。 <检测条件> Ex:488 nm,Em:500-560 nm <结果> 现有的线粒体染色剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题,但是MitoBright LT系列可以清晰地对线粒体染色,而不受背景影响。 通过超分辨率激光显微镜(STED)观察线粒体内部构造 线粒体疾病致突变的Cybrid细胞用MitoBright-LT-Deep Red染色,用超分辨激光显微镜(STED)观察,证实线粒体嵴结构异常。 <实验条件> 色素:MitoBrightLT Deep Red(100 nmol/l) 仪器:Leica超分辨率激光显微镜TCS SP8 STED 3X Ex:640 nm / Em: 650-700 nm STED激光:775nm <实验步骤> 1将细胞接种在玻璃培养皿中,培养2天(37℃,5% CO2)。 2去除培养基后,加入使用L-15培养基(含10%FBS)制备的MitoBrightLT Deep Red(100 nmol/l)工作液。 3孵育45分钟(37度,5% CO2)。 4去除上清液,用HBSS清洗两次。 5加入L-15培养基(含10%FBS),通过超分辨率激光显微镜(Leica TCS SP8 STED)进行观察。 以上数据由东京都老年学研究所衰老控制研究小组的大澤郁朗博士和藤田泰典博士友情提供。 产品文献 同仁化学研究所开发的线粒体长效染色荧光探针MitoBright LT系列在世界范围内广受科研人员的好评。在上市后的很短时间内,就出现了多篇使用MitoBright LT系列探针的论文,下面收集整理了部分的论文,其中红色字体标记的是使用本产品标记线粒体后,长时间(最长至5天)观察线粒体动态的报道,供感兴趣的科研人员参考。
荧光特性 MitoBright LT 染料的荧光特性 常见问题Q&A
规格性状 性状:本品是黄色液体 吸光度:0.600~0.800(490 nm附近) 线粒体长效荧光探针-深红色 MitoBright LT Deep Red 商品信息 储存条件:-20度保存,避光 运输条件:室温 特点: ● 荧光持续时间长 ● 可在含血清培养基中染色 ● 荧光显微镜、流式细胞仪均可检测 产品概述 细胞内有各种各样的细胞器,承担着各种各样必须的生命活动。其中线粒体不仅是通过氧化磷酸化反应生成ATP 的场所,它还与癌症、细胞衰老、阿尔兹海默症、帕金森综合症等神经退行性疾病紧密相关,因此它是细胞内最重要的细胞器之一。 在对线粒体的形态和动态进行观察以及定量检测时,通常使用小分子荧光探针标记和荧光蛋白的基因转染两种方法。荧光蛋白的基因转染存在转染效率不稳定等情况,因此操作简便的小分子荧光探针的使用更为广泛。现在市面上销售的小分子荧光探针中,多为含有氯甲基的探针,该探针存在观察时间短,染色时不能使用含血清的培养基,染色后荧光背景高等问题。MitoBright LT 荧光探针克服了这些问题,可在线粒体内稳定存在一天以上,条件合适的情况下可达到一周。而且与含有氯甲基的探针相比,染色后的荧光强度更高。本品直接采用DMSO 溶液包装,可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有Green, Red, Deep Red 等多种选择,可满足多重染色等各种各样的实验要求。 产品特点 1.可长时间在细胞内存在 用HBSS 清洗 HeLa 细胞后,分别用 MitoBright LT 和其他公司的试剂进行染色,更换含血清的培养基,培养 4 天后观察线粒体染色情况。其他公司的染色试剂在 4 天后荧光强度大幅降低,而 MitoBrightLT 依然维持着高荧光强度,并且在染色 7 日后依然可以观察到荧光。 <检测条件> MitoBright LT Green 、(T 公司)Green:Ex:488 nm/Em:500–560 nm MitoBright LT Red 、(T 公司)Red:Ex 561:nm/Em:560–620 nm MitoBright LT Deep Red 、(T 公司)Deep Red:Ex:640 nm/Em:650–700 nm 2.可以使用含血清培养基 用MitoBright LT 和其他公司试剂,分别用含有血清和不含血清的培养基染色。其他公司试剂在含有血清的培养基染色时,荧光明显减弱,而 MitoBright LT 在含有血清的培养基条件下,荧光没有减弱,可明显观察到线粒体的染色情况。 3.线粒体的分裂和融合 用100 nmol/l MitoBrightLT Red将HeLa细胞染色后,换入无血清培养基30分钟后观察线粒体形态。 <检测仪器> 共聚焦显微镜,放大倍率:63倍 <检测条件> Ex:561 nm/Em:560–620 nm 实验例 用流式细胞仪检测 1. 用RPMI 培养基(10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)配制Jurkat 细胞悬液(3.2×105cell/mL)播种于5 cm 培养皿,37℃,5% CO2 培养箱内培养一晚。 2. 去除培养基,加入MitoBright LT Working Solution (0.1 μmol/L, 5 mL), 37℃培养30 分钟。 3. 去除溶液,用 5mL 的PRPMI 培养基清洗细胞2 次。 4. 添加RPMI 培养基,持续培养细胞,每隔2 天用流式细胞仪检测。 在胶原蛋白涂覆玻璃板上观察线粒体荧光成像 胶原蛋白涂覆玻璃板通常用于线粒体形态的高倍放大观察。 现有的线粒体染色试剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题,但是MitoBright LT系列可以在不受背景影响的情况下清楚地对线粒体进行染色。 <染色条件> 将HeLa细胞接种在胶原蛋白涂覆玻璃板上,培养24小时,提取上清液并用HBSS洗涤。 加入100nmol / L的MitoBright LT Green工作溶液,培养30分钟后,提取上清液并用HBSS洗涤后用荧光显微镜观察。 <检测条件> Ex488 nm,Em 500-560 nm <结果> 现有的线粒体染色剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题,但是MitoBright LT系列可以清晰地对线粒体染色,而不受背景影响。 通过超分辨率激光显微镜(STED)观察线粒体内部构造 线粒体疾病致突变的Cybrid细胞用MitoBright-LT-Deep Red染色,用超分辨激光显微镜(STED)观察,证实线粒体嵴结构异常。 <实验条件> 色素:MitoBrightLT Deep Red(100nmol/l) 仪器:Leica超分辨率激光显微镜TCS SP8 STED 3X Ex. 640 nm / Em. 650-700 nm STED激光:775nm <实验步骤> 1将细胞接种在玻璃培养皿中,培养2天(37℃,5% CO2)。 2去除培养基后,加入使用L-15培养基(含10%FBS)制备的MitoBrightLT Deep Red(100nmol/l)工作液。 3孵育45分钟(37度,5% CO2)。 4去除上清液,用HBSS清洗两次。 5加入L-15培养基(含10%FBS),通过超分辨率激光显微镜(Leica TCS SP8 STED)进行观察。 以上数据由东京都老年学研究所衰老控制研究小组的大澤郁朗博士和藤田泰典博士友情提供。 产品论文 同仁化学研究所开发的线粒体长效染色荧光探针MitoBright LT系列在世界范围内广受科研人员的好评。在上市后的很短时间内,就出现了多篇使用MitoBright LT系列探针的论文,下面收集整理了部分的论文,其中红色字体标记的是使用本产品标记线粒体后,长时间(最长至5天)观察线粒体动态的报道,供感兴趣的科研人员参考。
荧光特性 MitoBright LT 染料的荧光特性
常见问题Q&A
规格性状 性状:本品是黄色液体 吸光度:0.600~0.800(490 nm附近) 产品文献 1、L. Zhou, Q. Guan, W. Li, Z. Zhang, Y. Li and Y. Dong, "A Ferrocene-Functionalized Covalent Organic Framework for Enhancing Chemodynamic Therapy via Redox Dyshomeostasis", 2021, doi:10.1002/smll.202101368. 2、Q. Guan, L. Zhou, Y. Dong, "Construction of Nanoscale Covalent Organic Frameworks via Photocatalysis-Involved Cascade Reactions for Tumor-Selective Treatment", 2021, doi:10.1002/adtp.202100177. 3、X. Chen, X Yin, L. Zhan, J. Zhang, Y. Zhang, Y. Wu, J. Ju, Y. Li, Q. Xue, X. Wang, C. Li, R. R. L. Reis and Y. Wang, "Organelle-Specific Anchored Delivery System Stretching a Reversal of Tumor Hypoxia Microenvironment to a Combinational Chemo-Photothermal Therapy", 2021, doi:10.1002/adfm.202108603. 4、S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, "In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling", 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172. 5、Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, "Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts", 2022, doi:10.1016/j.exger.2022.111866. 6、Wenxuan Yang, Satoshi Abe, Yasuhiko Tabata ,"Association with cationized gelatin nanospheres enhances cell internalization of mitochondria efficiency",2023,doi:10.1016/j.reth.2023.06.011. 特点: ● 一个样品同时检测两种指标 ● 包含所有所需试剂 ● 详细的操作步骤 规格性状 产品概述 线粒体功能与细胞代谢之间的联系是众所周知的,对一系列疾病都有影响,包括癌症、衰老和神经退行性疾病。已经发现,衰老细胞通常依靠糖酵解系统生存,而不是利用线粒体能量来源。相反,即使糖酵解系统受到抑制,通常严重依赖糖酵解的癌细胞激活线粒体功能依然能确保其存活,。鉴于这些观察结果,越来越有必要研究线粒体功能和糖酵解途径,以增强我们对细胞内代谢改变的理解。我们的试剂盒允许测量乳酸产生(通过乳酸测定)以检测糖酵解系统的变化,以及线粒体膜电位(通过JC-1测定)以评估线粒体功能。该试剂盒的概念是提供来自同一样品的全面一站式检测,以跟踪细胞内代谢的变化并指导后续更详细的分析。该试剂盒包括检测所需的所有试剂,还提供组合方案。 产品特点 任何刺激引起的细胞内代谢变化都可以通过测量乳酸产生和线粒体膜电位来检测。 在某些情况下,尽管细胞糖酵解系统或线粒体功能(能量产生的主要途径)受到损害,但细胞仍设法存活。据了解,这是因为细胞努力通过增强糖酵解来持续并防止细胞死亡,即使线粒体功能受损,或者在糖酵解受损时激活线粒体功能,同时监测糖酵解系统和线粒体功能。如下所述,可以深入了解细胞内发生的事情。 同时测量同一样品 通过从单个样品中分离上清液和细胞,可以同时测量线粒体膜电位(JC-1测定)和乳酸产生。详细的测量方法在说明书中描述。 检测原理 该试剂盒包括乳酸检测试剂盒,旨在通过测量WST甲臜吸光度来检测细胞培养基中的乳酸产生。此外,它还具有JC-1染料,用于使用荧光测量检测细胞内的线粒体膜电位。使用酶标仪在同一样品上轻松定量这两个靶标,便于评估代谢变化。 实验例 用糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)处理的HeLa细胞的细胞内代谢变化 当我们使用CCK-8*测定法评估8-DG处理的HeLa细胞的细胞活力时,我们观察到活力的微小变化。然而,鉴于观察到乳酸产生的减少,它促使我们质疑尽管糖酵解系统受到抑制,如何维持细胞活力。为了回答这个问题,我们使用JC-1测定法检查了线粒体膜电位。这项研究的结果表明,当糖酵解系统被2-DG抑制时,HeLa细胞通过增强线粒体功能来维持其存活。 ※ 细胞计数试剂盒-8(产品代码:CK04)不包含在本试剂盒中。
常见问题Q&A
糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit 货号:G270 糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒 Glycolysis/OXPHOS Assay Kit 商品信息 储存条件:0-5度保存,避光 运输条件:常温 特点: ●酶标仪即可检测,无需昂贵的检测仪器 ●试剂盒包含所有所需试剂 All in One Kit ●详尽的操作手册 规格性状 产品概述 很多癌细胞都是主要依靠糖酵解途径产生ATP,而近年来的研究发现,如果抑制癌细胞的糖酵解途径,细胞中的主要能量代谢会从糖酵解途径向线粒体的氧化磷酸化途径转移。对于这一现象的研究,有望成为新的抗癌药物研发的靶点,并且在细胞衰老、神经退行性疾病等其他疾病的治疗和药物研发的工作中也具有潜力,因此而备受瞩目。 本试剂盒通过酶标仪就可以方便快捷的检测糖酵解能、细胞代谢途径转移、细胞对糖酵解途径和氧化磷酸化途径的依赖程度。试剂盒中包含所有所需的试剂,可大幅减少实验前的准备工作和时间。
三种评价方式 用Oligomycin抑制氧化磷酸化(OXPHOS)的ATP合成,或者用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)抑制糖酵解(Glycolysis)的ATP合成,然后通过检测ATP的量(发光法)和Lactate的量(吸光度法)对下图中的①~③进行评价。 实验例 对糖酵解抑制剂(2-DG)处理后的HeLa细胞进行糖酵解能评价和代谢途径转移评价。糖酵解能评价(左图)的结果可以看出,HeLa细胞经过糖酵解抑制剂作用后,糖酵解能明显降低。而代谢途径转移评价的结果(右图)可以看出,糖酵解抑制剂作用后,HeLa细胞内的代谢途径开始向氧化磷酸化转移,由线粒体产生的ATP明显增加。 常见问题Q&A
※以上是按照不做预实验,最多可能检测的样品数量。 ※Lactate Assay时,如果培养基内含有血清,建议单独检测含有血清的培养基,作为背景空白扣除。 ※以上是先做预实验,再做正式实验时,最多可能检测的样品数量。 ※Lactate Assay时,如果培养基内含有血清,建议单独检测含有血清的培养基,作为背景空白扣除。 糖酵解能评价(Lactate Assay)的孔板设置例(n=3时) (左:不做预实验; 右:做预实验) 代谢途径转移评价(ATP Assay)的孔板设置例(n=3时) (左:不做预实验; 右:做预实验) 代谢途径依赖程度评价的孔板设置例(n=3时) (左:ATP Assay; 右:Lactate Assay)(不做预实验) 代谢途径依赖程度评价的孔板设置例(n=3时) (左:ATP Assay; 右:Lactate Assay)(做预实验)
需要用蛋白质定量进行校正的时候,请参考下图中的步骤。 ※在进行蛋白质定量校正的时候,由于ATP Assay的试剂的原因,不能使用ATP Assay或Lactate Assay检测时使用的细胞,请额外专门准备蛋白质定量用的细胞悬液。
产品文献 1、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”,2023, Advanced Science, doi:10.1002/advs.202302136 2、Li-Zhong Liu, Bowen Wang, Rui Zhang, Zangshu Wu, Yuxi Huang, Xiaoyang Zhang, Jiaying Zhou, Junbo Yi, Jian Shen, Ming-Yue Li & Ming Dong,The activated CD36-Src axis promotes lung adenocarcinoma cell proliferation and actin remodeling-involved metastasis in high-fat environment,2023,Cell Death&Disease, doi.org/10.1038/s41419-023-06078-3 特点: ● 检测灵敏度高 ● 操作简便,用时短 ● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选 ● 荧光染料泄露少,数据重现性高 产品概述 细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现,营养代谢不仅与能量的产生密切相关,还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质,细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂,泛用性并不高。另外,还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法,该方法虽然可以进行孔板检测,但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此,最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而,2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题,而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Blue是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏,得到重现性更高的实验数据。 产品优势 与传统方向相比的优势! 4大特征 Glucose Uptake Probe-Blue是蓝色荧光染料,可以轻松得与其他颜色的荧光染料共染色。另外,由于采用高亮度的荧光染料,相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。 ① 与其他荧光染料的共染色 可以根据实验需求,选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色,一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Blue与脂肪滴(红色:Lipi-Red 货号LD03)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。
<观测条件> 细胞: 3T3-L1 检测条件: Glucose Uptake Probe-Blue:Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm Lipi-Red:Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm ② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测 下面是分别使用不含葡萄糖的培养基以及高葡萄糖浓度的培养基培养A549细胞并用Glucose Uptake Probe-Blue进行染色的实验结果。可以观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Blue摄入的抑制作用。结果分别用荧光显微镜和流失细胞仪进行检测。
细胞:A549 检测条件 Glucose Uptake Assay Kit-Blue:Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm ③ 快速检测 使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue,即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤,也可以大幅缩短实验时间。 操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次,非常简便。 ④ 减少荧光染料的泄漏 使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞,可以抑制染料进入细胞后的泄漏,得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。
与传统法的比较 *以上结果源自A549细胞实验的结果,其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。 相关产品区别 与Glucose Assay Kit的不同点 Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。
1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。 Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。
2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。 Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。 详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。
实验例 实验例1:Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用 HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后,使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。
荧光显微镜观察 (Scale Bar: 50 μm) <观测条件> 细胞:HepG2细胞 使用培养基:MEM (5.5 mmol/l Glucose) 培养条件:5 µmol/l Cytochalasin B / MEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS), 37℃, 24 h 染色条件:Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM (0 mol/l Glucose), 37℃, 15 min 检测仪器:荧光显微镜; Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm 实验例2:Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进 胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。 荧光显微镜观察 (Scale Bar: 50 μm) <观测条件> 细胞:mouse adipocyte 使用培养基:DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS) 刺激条件:0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min 染色条件:Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min 检测仪器:荧光显微镜; Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm 实验例:饥饿培养诱导细胞自噬以及葡萄糖摄取能力的变化 用自噬体染色试剂DAPRed和自噬溶酶体染色试剂DALGreen染色HeLa细胞后,再用不含氨基酸的培养基饥饿培养3小时诱导细胞自噬。通过荧光显微镜观察发现DAPRed和DALGreen的荧光强度增强,证明细胞自噬的发生,另外通过Glucose Uptake Probe-Blue观察到细胞摄取葡萄糖的能力上升。 <检测条件> Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm Scale bar: 50 μm 常见问题Q&A
规格性状
Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green 货号:UP02 葡萄糖摄取检测试剂盒 葡萄糖代谢、葡萄糖摄取 商品信息 储存条件:0-5°C 运输条件:常温 特点: ● 检测灵敏度高 ● 操作简便,用时短 ● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选 ● 荧光染料泄露少,数据重现性高 产品概述 细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现,营养代谢不仅与能量的产生密切相关,还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质,细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂,泛用性并不高。另外,还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法,该方法虽然可以进行孔板检测,但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此,最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而,2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题,而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Green是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏,得到重现性更高的实验数据。 产品优势 与传统方向相比的优势! 4大特征 由于采用高亮度的荧光染料,相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。 ① 高灵敏度 2-NBDG在水中的荧光强度很低,而本试剂盒采用的荧光染料可以进行高灵敏度的葡萄糖摄取能力检测。 <观测条件> 细胞: A549细胞 检测仪器:荧光显微镜 检测滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm) ② 快速检测 使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Green,即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤,也可以大幅缩短实验时间。 操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次,非常简便 ③ 荧光酶标仪的多样品检测 2-NBDG很难用于荧光酶标仪的检测,而本试剂盒可用于荧光酶标仪的高通量筛选实验。 <检测条件> 细胞:A549细胞 Ex: 488 nm; Em: 520 nm ④ 减少荧光染料的泄漏 使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞,可以抑制染料进入细胞后的泄漏,得到重现性更高的数据。 使用HBSS清洗细胞时 使用WI Solution清洗细胞时 (Scale Bar: 50 μm) <观测条件> 细胞:A549细胞 检测仪器:荧光显微镜 检测滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm) 与传统法的比较 Glucose Uptake Probe-Green和2-NBDG都可以用于荧光显微镜和流式细胞仪的检测。而相比较于2-NBDG的激发波长,Glucose Uptake Probe-Green对于488 nm的激发光以及GFP, FITC滤光片的适用度更高。
※A549细胞的检测结果,不同的细胞种类,染料的滞留时间可能会有差异。 相关产品区别 与Glucose Assay Kit的不同点
Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。
1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消耗量。 Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。
2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。 Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。
Glucose Assay Kit-WST与本试剂盒的差别,通过下面的检测实例来说明。
实验例:用葡萄糖摄取抑制剂(Cytochalasin B)处理的HepG2细胞的葡萄糖消费量和葡萄糖摄取能力的检测。 实验的流程和检测结果: 实验例 实验例1:Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用 HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后,使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察以及数值化的检测。 荧光显微镜观察 (Scale Bar: 50 μm)
<观测条件> 细胞:HepG2细胞 使用培养基:MEM (5.5 mmol/l Glucose) 培养条件:5 µmol/l Cytochalasin B / MEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS), 37℃, 24 h 染色条件:Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM (0 mol/l Glucose), 37℃, 15 min 检测仪器:荧光显微镜; 滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm) 荧光酶标仪 <检测条件> Ex: 488 nm; Em: 520 nm 实验例2:Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进 胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。 荧光显微镜观察 (Scale Bar: 50 μm) <观测条件> 细胞:mouse adipocyte 使用培养基:DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS) 刺激条件:0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min 染色条件:Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min 检测仪器:荧光显微镜; 滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm) 荧光酶标仪检测 <检测条件> Ex: 488 nm; Em: 520 nm ※由于脂肪细胞的特性,很难在孔板上均匀分布,所以实验数据会有一些孔间差。 <实验操作> 1.脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中,过夜培养。 2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后,加入不含葡萄糖的培养基(0 or 1 μmol/l Insulin)。 3.在37℃下培养15 min。 4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution, 37℃下培养15 min。 5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后,再次添加WI Solution(4℃)。 6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。 实验例3:前脂肪细胞和细胞脂肪细胞的葡萄糖摄取能力的比较 使用本试剂盒对前脂肪细胞(preadipocyte)和脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力进行高灵敏度检测。 荧光显微镜观察 (Scale Bar: 50 μm) <观测条件> 细胞:preadipocyte, adipocyte 使用培养基:DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS) 染色条件:Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min 检测仪器:荧光显微镜; 滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm) 荧光酶标仪检测 <检测条件> Ex: 488 nm; Em: 520 nm ※由于脂肪细胞的特性,很难在孔板上均匀分布,所以实验数据会有一些孔间差。 <实验操作> 1.前脂肪细胞和脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中,过夜培养。 2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后,加入不含葡萄糖的培养基。 3.在37℃下培养15 min。 4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution, 37℃下培养15 min。 5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后,再次添加WI Solution(4℃)。 6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。 实验例4:饥饿培养引起的细胞自噬和葡萄糖摄取变化 用自噬体染料DAPRed和自噬溶酶体染料DALGreen染色HeLa细胞后,用不含氨基酸的培养基培养3小时诱导细胞自噬。通过DAPRed和DALGreen的荧光强度增高确认细胞发生了细胞自噬,另外通过使用Glucose Uptake Probe-Blue发现细胞摄取葡萄糖的能力上升。 (Scale Bar: 50 μm) <检测条件> 荧光显微镜 Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm 常见问题Q&A
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参考文献
Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red 货号:UP03 葡萄糖摄取检测试剂盒 葡萄糖代谢、葡萄糖摄取 商品信息 储存条件:0-5°C 运输条件:常温 特点: ● 检测灵敏度高 ● 操作简便,用时短 ● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选 ● 荧光染料泄露少,数据重现性高 细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现,营养代谢不仅与能量的产生密切相关,还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质,细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂,泛用性并不高。另外,还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法,该方法虽然可以进行孔板检测,但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此,最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而,2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题,而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Red是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏,得到重现性更高的实验数据。 产品优势 与传统方向相比的优势! 4大特征 Glucose Uptake Probe-Red是红色荧光染料,可以与红色野外其他颜色的荧光染料共染色。另外,由于采用高亮度的荧光染料,相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。 ① 与其他荧光染料的共染色 可以根据实验需求,选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色,一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Red与脂肪滴(绿色:Lipi-Green货号LD02)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。 <观测条件> 细胞: 3T3-L1 检测条件: Glucose Uptake Probe-Red:Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm Lipi-Green:Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm ② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测 Glucose Uptake Probe-Red除了荧光显微镜和流式细胞仪以外还可以用荧光酶标仪进行检测。下面是A549细胞的葡萄糖摄取能力的检测结果,可以明显观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Red摄入的抑制作用。 细胞:A549 检测条件 Glucose Uptake Assay Kit-Red:Ex = 545 nm, Em = 605 nm ③ 快速检测 使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue,即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤,也可以大幅缩短实验时间。 操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次,非常简便。
④ 减少荧光染料的泄漏 使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞,可以抑制染料进入细胞后的泄漏,得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。 与传统法的比较 *以上结果源自A549细胞实验的结果,其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。 相关产品区别 与Glucose Assay Kit的不同点 Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。
1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。 Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。
2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。 Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。
详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02 的页面。 实验例 实验例1:Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用 HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后,使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。 荧光显微镜观察 (Scale Bar: 50 μm)
<观测条件> 细胞:HepG2细胞 使用培养基:MEM (5.5 mmol/l Glucose) 培养条件:5 µmol/l Cytochalasin B / MEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS), 37℃, 24 h 染色条件:Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM(0 mol/l Glucose), 37℃, 15 min 检测仪器:荧光显微镜; Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm 实验例2:Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进 胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察 (Scale Bar: 50 μm)
<观测条件> 细胞:mouse adipocyte 使用培养基:DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS) 刺激条件:0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min 染色条件:Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min 检测仪器:荧光显微镜; Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm 常见问题Q&A
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Glucose Assay Kit-WST试剂盒 货号:G264 葡萄糖检测试剂盒 Glucose Assay Kit-WST 商品信息 储存条件:0-5度保存,避光防潮 运输条件:室温 特点:
● 细胞上清液和细胞样品均适用 ● 稳定性好 ●可使用酶标仪高通量筛选 试剂盒内含
概述 葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质,也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标,在癌症研究中,也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。研究表明,抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性,可以抑制癌细胞的生长。 葡萄糖检测试剂盒(Glucose Assay Kit-WST)可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖,通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖,适合用96孔板检测,可以同时检测多个样品。
原理 *本试剂盒可以检测细胞上清液*的葡萄糖的含量,通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外,试剂盒里有葡萄糖标准液,可以制作标准曲线,测定样品中的葡萄糖浓度。 *要测定细胞上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。 操作步骤 制作葡萄糖标准曲线 可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。 实验例 用Phloretin抑制葡萄糖的摄取 1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml,在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。 2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液,在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。 3. 将细胞悬液转移到锥形管中,在1,500 rpm离心5 min。 4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中,用超纯水稀释30倍。 5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。 6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。 7. 在每孔中加入50 µl工作液。 8. 在37℃培养箱中培养30 min。 9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度,根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。 Phloretin抑制葡萄糖的摄取 实验证实,细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。 常见问题Q&A
参考文献
*要测定细胞培养上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。 特点: ● 细胞上清液和细胞样品均适用 ● 稳定性好 ●可使用酶标仪高通量筛选 试剂盒内含
概述 葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质,也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标,在癌症研究中,也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。研究表明,抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性,可以抑制癌细胞的生长。 葡萄糖检测试剂盒(Glucose Assay Kit-WST)可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖,通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖,适合用96孔板检测,可以同时检测多个样品。
原理 *本试剂盒可以检测细胞上清液*的葡萄糖的含量,通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外,试剂盒里有葡萄糖标准液,可以制作标准曲线,测定样品中的葡萄糖浓度。 *要测定细胞上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。 操作步骤 制作葡萄糖标准曲线 可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。 实验例 用Phloretin抑制葡萄糖的摄取 1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml,在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。 2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液,在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。 3. 将细胞悬液转移到锥形管中,在1,500 rpm离心5 min。 4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中,用超纯水稀释30倍。 5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。 6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。 7. 在每孔中加入50 µl工作液。 8. 在37℃培养箱中培养30 min。 9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度,根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。 Phloretin抑制葡萄糖的摄取 实验证实,细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。 常见问题Q&A
参考文献
*要测定细胞培养上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。 特点: ● 细胞上清液和细胞样品均适用 ● 操作简便 ● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸 ● 试剂稳定性高 ● 享有显色底物WST专利 试剂盒内含 概述 乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物,也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明,乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。 Lactate Assay Kit-WST®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸,并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量,可用96孔板检测,灵敏度高,最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。 WST®:WST是日本同仁化学研究所的注册商标 原理 本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。 另外,试剂盒中含有乳酸标准液,可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。 特点 特点1:操作简单,只需要加入试剂 只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂,培养即可。 特点2:试剂稳定性高 乳酸标准曲线 可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。 当乳酸浓度在1 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。 实验例 2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用 1、在96孔板中接种1×104个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素),在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。 2、去除上清液后,在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。 3、在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。 4、培养后,吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中,并用超纯水稀释8倍制备样品溶液,然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。 5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。 6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。 7、在每孔中加入80 µl工作液。 8、在37℃培养箱中培养30 min。 9、用酶标仪测定450 nm的吸光度,并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。 2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用,随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加,乳酸浓度逐渐减少
葡萄糖和乳酸的测定例 用葡萄糖测定试剂盒(货号:G264)和乳酸测定试剂盒检测(货号:L256):检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。
■实验条件 细胞:Jurkat细胞(5×105细胞) 药物:Phloretin(终浓度:100 µmol/l) 培养时间:过夜培养 ■结果 Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取,减少了葡萄糖的消耗,增加了培养基中葡萄糖的量,并减少了乳酸的量。 常见问题Q&A
参考文献
Lactate Assay Kit-WST试剂盒 货号:L256 乳酸检测试剂盒 Lactate Assay Kit-WST 商品信息 储存条件:0-5度保存,避光 运输条件:室温 特点: ● 细胞上清液和细胞样品均适用 ● 操作简便 ● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸 ● 试剂稳定性高 ● 享有显色底物WST专利 试剂盒内含 概述 乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物,也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明,乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。 Lactate Assay Kit-WST®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸,并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量,可用96孔板检测,灵敏度高,最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。 WST®:WST是日本同仁化学研究所的注册商标 原理 本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。 另外,试剂盒中含有乳酸标准液,可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。 特点 特点1:操作简单,只需要加入试剂 只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂,培养即可。 特点2:试剂稳定性高 乳酸标准曲线 可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。 当乳酸浓度在1 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。 实验例 2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用 1、在96孔板中接种1×104个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素),在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。 2、去除上清液后,在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。 3、在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。 4、培养后,吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中,并用超纯水稀释8倍制备样品溶液,然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。 5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。 6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。 7、在每孔中加入80 µl工作液。 8、在37℃培养箱中培养30 min。 9、用酶标仪测定450 nm的吸光度,并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。 2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用,随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加,乳酸浓度逐渐减少
葡萄糖和乳酸的测定例 用葡萄糖测定试剂盒(货号:G264)和乳酸测定试剂盒检测(货号:L256):检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。
■实验条件 细胞:Jurkat细胞(5×105细胞) 药物:Phloretin(终浓度:100 µmol/l) 培养时间:过夜培养 ■结果 Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取,减少了葡萄糖的消耗,增加了培养基中葡萄糖的量,并减少了乳酸的量。 常见问题Q&A
参考文献
α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric 货号:K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法) α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric 商品信息 储存条件:0-5度保存 运输条件:常温 特点:
● 检测结果的重现性好 ● 可作为线粒体活性的指标 ● 多角度了解细胞代谢变化 规格性状
产品概述 α-酮戊二酸(α-KG)是TCA循环中重要的中间体。它被作为进入TCA循环的葡萄糖代谢物增加的指标以及谷氨酰胺代谢(Glutaminolysis,一种谷氨酰胺底物与α-KG反应的通路)增加的指标。α-KG在神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)的产生中起着重要作用,不仅如此它还担负着一定的清除细胞内的活性氧的功能,是非常重要的细胞代谢指标之一。 检测原理 α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric可以定量检测α-酮戊二酸(α-KG)。通过检测反应生成的试卤灵(Resorufin)的荧光(Ex:530 - 560 nm、Em:580 - 600 nm)对细胞内的α-KG进行定量。另外,本试剂盒还可以通过使用96孔板进行多样品检测。 检测操作 整个操作过程,从细胞的前处理到荧光酶标仪检测,只需要按照操作说明书的步骤添加试剂即可检测细胞内α-酮戊二酸(α-KG)的浓度。而且,本试剂盒专门针对同类型检测方法中普遍存在的结果重现性差的问题进行了优化,即使是第一次做α-KG检测实验的科研人员也可以放心使用。 ► 结果重现性高的两个秘诀 1) 样品的前处理 同类型的检测试剂盒在样品前处理时需要微量的pH调节、过滤膜过滤等操作,这是导致结果重现性差的原因之一。而同仁化学研究所的α-KG检测试剂盒,只需要按照说明书添加试剂,可以大幅减少前处理过程中产生的操作误差。 2) α-Ketoglutarate的检测 其他检测试剂盒使用与上图相同的原理,但是由于①和②的两步反应同时在96孔板里进行,这是造成误差的另一个重要原因。而同仁化学研究所的试剂盒将这两步反应分开进行,进一步降低了误差。 标准曲线的作成例 本试剂盒附带α-KG的标准品,可以通过制作标准曲线来定量的检测样品中的α-KG浓度。如果样品中的α-KG浓度高于20 μmol/l,请预先稀释样品再检测。 实验例 Doxorubicin(DOX)刺激引起的细胞内代谢变化 阿霉素(Doxorubicin, DOX)可以作用于 细胞周期的G2/M期,停止细胞的增殖并且细胞衰老,利用DOX作用于A549细胞,会导致胞内α-KG浓度增加。另外通过SG 03 Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal检测细胞衰老、C548 Cell Cycle Assay Solution Deep Red / C549 Cell Cycle Assay Solution Blue检测细胞周期、MT09 JC-1 MitoMP Detection Kit检测线粒体膜电位的结果如下:
Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化 <使用产品> ・细胞内ATP:CK18 Cell Counting Kit-Luminescence ・细胞内GSH:G263 GSSG/GSH Quantification Kit II ・细胞内ROS:R252 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ・胞外谷氨酸:G269 Glutamate Assay Kit-WST <实验条件> 细胞:A549细胞(1 x 106 cells) 暴露时间: 48 h
参考文献) Shogo Okazaki et al., "Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma". Cancer Sci., 2019, doi:10.1111/cas.14182.
NASH诱导小鼠的肝脏组织的代谢变化 NASH(非酒精性脂肪肝)的病变组织中有ATP、α-KG、NAD的量减少的特点。使用4周龄的高脂肪食物投喂(引发NASH)的1型糖尿病模型小鼠(STAM模型)的肝脏组织,检测其中的ATP、α-KG、NAD水平的变化。结果显示,NASH诱导后10周龄的小鼠组中ATP、α-KG、NAD的浓度降低。 ※详细的实验步骤请参考FAQ“是否有检测组织的实验例
<使用产品> ・组织内ATP:CK18 Cell Counting Kit-Luminescence ・组织内NAD:N509 NAD/NADH Assay Kit-WST
<实验参考文献>
常见问题Q&A
具体的实验步骤如下:
碱性提取法提取的肝脏样品中的代谢指标检测
1.取大约100 mg小鼠肝脏组织样品加至500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液中。 ※必须使用经过灌流操作完全脱血的组织样品,否则残留的血液会影响检测结果。 2.用Dounce型组织研磨器研磨肝脏组织。 3.将研磨后的样品回收至微管中,用500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液清洗研磨器,并将清洗后的液体也 一起转移到回收样品的微管中(共约1 ml)。 4.向回收样品的微管中加入1 ml预冷的超纯水,充分混合后在冰浴上静置5 min(共约2 ml)。 ※由于溶液的粘性较高,有时会出现离心后难以分离的情况。此时,用25 g左右的细针头注射器不断 吸取/推出(大约20-30次),直到可以顺畅的吹打溶液为止。 5.离心机12,000xg,4 ℃离心5 min。 α-KG检测用样品的制备
6.取900μl上一步操作(步骤5)得到的溶液,加入200μl 1mol/l KH2PO4水溶液进行中和,混匀后在冰浴上 静置5 min。 7.离心机12,000xg,4 ℃离心5 min,取1 ml上清液至新的微管中作为检测样品。
<检测时的注意事项> ※组织提取的样品无法保存,请在当天内完成检测。 ※枪头中残留的样品溶液时造成误差的原因之一,吸取样品溶液时尽量缓慢,减少枪头中残留的样品溶液。 ※在稀释标准品和样品的时候,使用0.5 mol/l KOH水溶液和1mol/l KH2PO4水溶液按照9:5比率混合的溶液。
<检测实例> 诱导非酒精性脂肪肝的小鼠肝脏组中α-KG量的变化
特点: ● 无需任何操作技巧 ● 与超速离心法相当的回收率 ● Filter Holder可重复利用 规格性状 产品概述 ExoIsolator Exosome Isolation Kit可以从细胞培养上清液中快速分离出外泌体, 其回收率与超速离心法相当。试剂盒中内含的 Isolation Filter可以将细胞培养上清液中的外泌体捕获分离,因此无需复杂的操作即可在短时间快速获取外泌体。 简单的操作:无需任何操作技巧 ExoIsolator Exosome Isolation Kit的操作过程极为简单。组装好Filter Holder和Isolation Filter进行减压过滤,再用PBS回收过滤膜表面上的外泌体即可。这种方法可以尽可能的减少外泌体的损失,而且不易产生人为操作因素上的差别。 回收效率高:与超速离心法相当 目前最常用的外泌体分离方法是超速离心法,使用超速离心法和ExoIsolator Exosome Isolation Kit同时回收HEK293S细胞培养液中的外泌体,通过外泌体粒度分布(图1)、粒子数(图2a)和外泌体marker的表达量(图2b)检测两种方法得到的外泌体并进行比较。结果可以看出,两种方法得到的外泌体的粒度分布和粒子数基本相同,而外泌体marker的表达量的结果显示,在相同蛋白量的情况下,ExoIsolator 的外泌体标志物更高,说明ExoIsolator 比超速离心法得到的外泌体纯度更高。(专利申请中) 图1. 提取得到的外泌体的粒度分布
图2. 粒子数(a)与外泌体标志物的表达量(b) 试剂盒的组成 本试剂盒包含Filter Holder和Isolation Filter,其中Filter Holder可以通过高压蒸汽锅灭菌后重复使用。
另外,作为消耗品的Isolation Filter 10枚装 单独销售。 具体请参考产品页面:货号EX11 产品名:ExoIsolator Isolation Filter。
FAQ
ExoIsolator Isolation Filter 货号:EX11 外泌体(Exosomes)提取试剂盒 ExoIsolator Isolation Filter 商品信息 储存条件:常温 运输条件:常温 特点: ● 配套的Filter Holder另外单独销售 ● 10枚一组的大包装 规格性状 ・Isolation Filter ×10 请注意:单独使用本产品不能提取外泌体 请与 EX10 ExoIsolator Exosome Isolation Kit配合使用。 ExoIsolator Exosome Isolation Kit使用的Isolation Filter 本产品是ExoIsolator Exosome Isolation Kit中附带的Isolation Filter的独立大包装(10枚)。 重复利用ExoIsolator试剂盒时配套使用。 规格性状 ・Isolation Filter ×10 请注意:单独使用本产品不能提取外泌体 请与 EX10 ExoIsolator Exosome Isolation Kit配合使用。 ExoIsolator Exosome Isolation Kit使用的Isolation Filter 本产品是ExoIsolator Exosome Isolation Kit中附带的Isolation Filter的独立大包装(10枚)。 重复利用ExoIsolator试剂盒时配套使用。
特点: ● 回收率高 ● 多种颜色可供选择 试剂盒内含 概述 近年来研究发现,外泌体作为细胞外囊泡(Extracellular vesicle; EV)的一种,与癌症的恶化与转移密切相关, 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信,细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要,然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点(1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子,造成背景增高)。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料,并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色,可满足多重染色在内的各种实验需求。 技术情报 更准确地观察外泌体的动态 常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司 产品P),染料本身会引起凝集,产生不来源于外泌体的荧光聚点,导致外泌体的性质变化和背景上升等问题1)2)。 ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green,Red,Deep Red)不会引起荧光凝集,也几乎不影响外泌体的性质,因此可以更准确地观察外来体的动力学。 参考文献 1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028. 2) Pužar Dominkuš P et al.,“PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.”Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013. 特点 特点1:荧光染料不会在细胞外聚集 将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中,并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。 结果,在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中,发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。 Mem Dye-Deep Red(紫):Ex: 640 nm/ Em: 640-760 nm S公司 P产品(绿):Ex: 561 nm/ Em: 560-620 nm S公司 P产品(红):Ex: 640 nm/ Em: 650-700 nm 实验条件 通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg),使用不同荧光染料染色后,添加到HeLa细胞(1.25×104cells)中,孵育24小时,观察清洗后的荧光图像。 通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现,Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象,而P产品(绿色或红色)发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。 *检测装置:LM10-HSBFT 14(Nanosight公司生产) 与Mem-Dye溶液相比,P产品溶液的粒径也发生变化 另外,Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样,也没有发现荧光聚集的现象。 特点2:对外泌体的性质几乎没有影响 比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色前后的外泌体,通过测定NTA(纳米粒子跟踪分析)和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。 结果,确认使用产品P(绿色或红色)会因染色而引起的外泌体的变化。 而Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)对外泌体的性质几乎没有影响。 对外泌体颗粒直径的影响 制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。 结果,用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体,粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左),但在产品P染色前后,粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。
*检测装置:LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产) 对外泌体膜电位的影响 制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。 结果证实,使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较,使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多 *检测装置:Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产) 参考文献 Takashi Shimomura et al., "New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes".bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295. 特点3:外泌体的标记和纯化一步到位 ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。 纯化方法(未反应染料的去除)的比较 ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管,与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比,能够以更高的回收率纯化外泌体。
关于使用过滤管进行纯化的有效性,常见问题是:标记后的纯化操作时,过滤膜上有颜色残留,能否确定未反应的染料彻底分离了?详见Q&A。 特点4:多种颜色选择 ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。 ■实验条件 超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。 ■观察条件 Green: Ex: 488 nm / Em: 490-540 nm Red: Ex: 561 nm / Em: 570-640 nm Deep Red: Ex: 640 nm / Em: 640-760 nm
常见问题Q&A
① Exosome + Buffer ② Only Buffer Fluorescent images at 4 h incubation Detection conditions Green:Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm Red :Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm Deep Red:Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm 参考文献 1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, doi:10.1016/j.tox.2020.152544. 2) Y. Nakao, T. Fukuda, Q. Zhang, T. Sanui, T. Shinjo, X. Kou, C. Chen, D. Liu, Y. Watanabe, C. Hayashi, H. Yamato, K. Yotsumoto, U. Tanaka, T. Taketomi, T. Uchiumi, A. D. Le, S. Shi, F. Nishiura, "Exosomes from TNF-α-treated human gingiva-derived MSCs enhance M2 macrophage polarization and inhibit periodontal bone loss", Acta Biomater., 2020, doi:10.1016/j.actbio.2020.12.046. 特点: ● 特异性外泌体定位,细胞外不聚集 ● 回收率高 ● 多种颜色可供选择 试剂盒内含 概述 近年来研究发现,外泌体作为细胞外囊泡(Extracellular vesicle; EV)的一种,与癌症的恶化与转移密切相关, 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信,细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要,然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点(1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子,造成背景增高)。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料,并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色,可满足多重染色在内的各种实验需求。
技术情报 更准确地观察外泌体的动态 常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司 产品P),染料本身会引起凝集,产生不来源于外泌体的荧光聚点,导致外泌体的性质变化和背景上升等问题1)2)。 ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green,Red,Deep Red)不会引起荧光凝集,也几乎不影响外泌体的性质,因此可以更准确地观察外来体的动力学。 参考文献 1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028. 2) Pužar Dominkuš P et al.,“PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.”Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013.
特点 特点1:荧光染料不会在细胞外聚集 将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中,并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。 结果,在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中,发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。 Mem Dye-Deep Red(紫):Ex: 640 nm/ Em: 640-760 nm S公司 P产品(绿):Ex: 561 nm/ Em: 560-620 nm S公司 P产品(红):Ex: 640 nm/ Em: 650-700 nm 实验条件 通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg),使用不同荧光染料染色后,添加到HeLa细胞(1.25×104cells)中,孵育24小时,观察清洗后的荧光图像。 通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现,Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象,而P产品(绿色或红色)发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。 *检测装置:LM10-HSBFT 14(Nanosight公司生产) 与Mem-Dye溶液相比,P产品溶液的粒径也发生变化 另外,Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样,也没有发现荧光聚集的现象。 特点2:对外泌体的性质几乎没有影响 比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色前后的外泌体,通过测定NTA(纳米粒子跟踪分析)和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。 结果,确认使用产品P(绿色或红色)会因染色而引起的外泌体的变化。 而Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)对外泌体的性质几乎没有影响。 对外泌体颗粒直径的影响 制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。 结果,用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体,粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左),但在产品P染色前后,粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。
*检测装置:LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产) 对外泌体膜电位的影响 制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。 结果证实,使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较,使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多 *检测装置:Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产) 参考文献 Takashi Shimomura et al., "New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes".bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295. 特点3:外泌体的标记和纯化一步到位 ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。 纯化方法(未反应染料的去除)的比较 ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管,与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比,能够以更高的回收率纯化外泌体。
关于使用过滤管进行纯化的有效性,常见问题是:标记后的纯化操作时,过滤膜上有颜色残留,能否确定未反应的染料彻底分离了?详见Q&A。 特点4:多种颜色选择 ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。 ■实验条件 超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。 ■观察条件 Green: Ex: 488 nm / Em: 490-540 nm Red: Ex: 561 nm / Em: 570-640 nm Deep Red: Ex: 640 nm / Em: 640-760 nm
常见问题Q&A
① Exosome + Buffer ② Only Buffer Fluorescent images at 4 h incubation Detection conditions Green:Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm Red :Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm Deep Red:Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm 参考文献 1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, https://doi.org/10.1016/j.tox.2020.152544. 特点: ● 特异性外泌体定位,细胞外不聚集 ● 回收率高 ● 多种颜色可供选择 试剂盒内含 概述 近年来研究发现,外泌体作为细胞外囊泡(Extracellular vesicle; EV)的一种,与癌症的恶化与转移密切相关, 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信,细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要,然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点(1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子,造成背景增高)。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料,并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色,可满足多重染色在内的各种实验需求。 技术情报
更准确地观察外泌体的动态 常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司 产品P),染料本身会引起凝集,产生不来源于外泌体的荧光聚点,导致外泌体的性质变化和背景上升等问题1)2)。 ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green,Red,Deep Red)不会引起荧光凝集,也几乎不影响外泌体的性质,因此可以更准确地观察外来体的动力学。 参考文献 1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028. 2) Pužar Dominkuš P et al.,“PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.”Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013. 特点 特点1:荧光染料不会在细胞外聚集 将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中,并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。 结果,在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中,发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。 Mem Dye-Deep Red(紫):Ex: 640 nm/ Em: 640-760 nm S公司 P产品(绿):Ex: 561 nm/ Em: 560-620 nm S公司 P产品(红):Ex: 640 nm/ Em: 650-700 nm 实验条件 通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg),使用不同荧光染料染色后,添加到HeLa细胞(1.25×104cells)中,孵育24小时,观察清洗后的荧光图像。 通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现,Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象,而P产品(绿色或红色)发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。 *检测装置:LM10-HSBFT 14(Nanosight公司生产) 与Mem-Dye溶液相比,P产品溶液的粒径也发生变化 另外,Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样,也没有发现荧光聚集的现象。 特点2:对外泌体的性质几乎没有影响 比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色前后的外泌体,通过测定NTA(纳米粒子跟踪分析)和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。 结果,确认使用产品P(绿色或红色)会因染色而引起的外泌体的变化。 而Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)对外泌体的性质几乎没有影响。 对外泌体颗粒直径的影响 制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。 结果,用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体,粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左),但在产品P染色前后,粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。
*检测装置:LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产) 对外泌体膜电位的影响 制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。 结果证实,使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较,使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多 *检测装置:Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产) 参考文献 Takashi Shimomura et al., "New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes".bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295. 特点3:外泌体的标记和纯化一步到位 ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。 纯化方法(未反应染料的去除)的比较 ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管,与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比,能够以更高的回收率纯化外泌体。
关于使用过滤管进行纯化的有效性,常见问题是:标记后的纯化操作时,过滤膜上有颜色残留,能否确定未反应的染料彻底分离了?详见Q&A。 特点4:多种颜色选择 ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。 ■实验条件 超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。 ■观察条件 Green: Ex: 488 nm / Em: 490-540 nm Red: Ex: 561 nm / Em: 570-640 nm Deep Red: Ex: 640 nm / Em: 640-760 nm
实验例 外泌体的定位随时间而变化 ■实验条件 通过超速离心法纯化的外泌体(蛋白质量为10 µg)用Mem Dye-Deep Red(外泌体膜染色试剂)染色,并加入到用溶酶体染色试剂染色的HeLa细胞(1.25×104细胞)中,在1小时和4小时后观察到荧光图像。 结果表明,随着时间的推移Mem Dye-Deep Red的荧光点(紫色)与溶酶体的定位(绿色)重叠(白色),外泌体的定位随时间的变化而变化。 观察条件: Mem Dye-Deep Red:Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm 溶酶体染色试剂: Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm 常见问题Q&A
① Exosome + Buffer ② Only Buffer Fluorescent images at 4 h incubation Detection conditions Green:Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm Red :Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm Deep Red:Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm 参考文献 1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, https://doi.org/10.1016/j.tox.2020.152544. 特点: ● 特异性外泌体定位,细胞外不聚集 ● 回收率高 ● 多种颜色可供选择 试剂盒内含 概述 近年来研究发现,外泌体作为细胞外囊泡(Extracellular vesicle; EV)的一种,与癌症的恶化与转移密切相关, 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信,细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要,然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点(1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子,造成背景增高)。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料,并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色,可满足多重染色在内的各种实验需求。 特点 特点1:外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较 ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管,与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比,能够以更高的回收率纯化外泌体。
关于使用过滤管进行纯化的有效性,常见问题是:标记后的纯化操作时,过滤膜上有颜色残留,能否确定未反应的染料彻底分离了?详见Q&A。 特点2:多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。 ■实验条件 超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。 ■观察条件 Green: Ex: 488 nm / Em: 490-540 nm Red: Ex: 561 nm / Em: 570-640 nm Deep Red: Ex: 640 nm / Em: 640-760 nm 实验例 实验例:确认外泌体的局部存在 将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称:EX06,Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称:EX02,Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中,通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实,用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。 观察条件 Protein Dye-Deep Red(紫):Ex:640 nm / Em:640-760 nm Mem Dye-Red(红色):Ex:561 nm / Em:570-640 nm 溶酶体染色试剂(绿):Ex:488 nm / Em:490-540 nm 实验条件 将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色,添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中,孵育3.5小时后对溶酶体进行染色,观察洗涤后的荧光图像。
常见问题Q&A
① Exosome + Buffer ② Only Buffer Fluorescent images at 4 h incubation Detection conditions Green:Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm Red :Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm Deep Red:Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm 特点: ● 特异性外泌体定位,细胞外不聚集 ● 回收率高 ● 多种颜色可供选择 试剂盒内含 概述 近年来研究发现,外泌体作为细胞外囊泡(Extracellular vesicle; EV)的一种,与癌症的恶化与转移密切相关, 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信,细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要,然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点(1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子,造成背景增高)。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料,并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色,可满足多重染色在内的各种实验需求。 特点 特点1:外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较 ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管,与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比,能够以更高的回收率纯化外泌体。
关于使用过滤管进行纯化的有效性,常见问题是:标记后的纯化操作时,过滤膜上有颜色残留,能否确定未反应的染料彻底分离了?详见Q&A。 特点2:多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。 ■实验条件 超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。 ■观察条件 Green: Ex: 488 nm / Em: 490-540 nm Red: Ex: 561 nm / Em: 570-640 nm Deep Red: Ex: 640 nm / Em: 640-760 nm 实验例 实验例:确认外泌体的局部存在 将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称:EX06,Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称:EX02,Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中,通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实,用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。 观察条件 Protein Dye-Deep Red(紫):Ex:640 nm / Em:640-760 nm Mem Dye-Red(红色):Ex:561 nm / Em:570-640 nm 溶酶体染色试剂(绿):Ex:488 nm / Em:490-540 nm
实验条件 将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色,添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中,孵育3.5小时后对溶酶体进行染色,观察洗涤后的荧光图像。
常见问题Q&A
① Exosome + Buffer ② Only Buffer Fluorescent images at 4 h incubation Detection conditions Green:Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm Red :Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm Deep Red:Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm 特点: ● 特异性外泌体定位,细胞外不聚集 ● 回收率高 ● 多种颜色可供选择 试剂盒内含 概述 近年来研究发现,外泌体作为细胞外囊泡(Extracellular vesicle; EV)的一种,与癌症的恶化与转移密切相关, 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信,细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要,然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点(1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子,造成背景增高)。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料,并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色,可满足多重染色在内的各种实验需求。
特点 特点1:外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较 ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管,与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比,能够以更高的回收率纯化外泌体。
关于使用过滤管进行纯化的有效性,常见问题是:标记后的纯化操作时,过滤膜上有颜色残留,能否确定未反应的染料彻底分离了?详见Q&A。 特点2:多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。 ■实验条件 超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。 ■观察条件 Green: Ex: 488 nm / Em: 490-540 nm Red: Ex: 561 nm / Em: 570-640 nm Deep Red: Ex: 640 nm / Em: 640-760 nm 实验例 实验例:确认外泌体的局部存在 将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称:EX06,Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称:EX02,Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中,通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实,用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。 观察条件 Protein Dye-Deep Red(紫):Ex:640 nm / Em:640-760 nm Mem Dye-Red(红色):Ex:561 nm / Em:570-640 nm 溶酶体染色试剂(绿):Ex:488 nm / Em:490-540 nm
实验条件 将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色,添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中,孵育3.5小时后对溶酶体进行染色,观察洗涤后的荧光图像。
常见问题Q&A
① Exosome + Buffer ② Only Buffer Fluorescent images at 4 h incubation Detection conditions Green:Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm Red :Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm Deep Red:Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
产品概述 近年来的研究发现,人体内的抗氧化能力的降低与各种疾病的产生息息相关,因此人们对于具有抗氧化能力的功能食品的需求越来越高。 根据日本高知大学岛村等人的文献报道 1),使用稳定的自由基 DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)作为底物的抗氧化能力检测法是数据重现性的一种方法。本试剂盒依据岛村老师的检测方法,将DPPH法的过程进行了改良和标准化,解决了以往实验中孔间差较大、试剂配制过程繁冗等问题。 本试剂盒在日本高知大学农林海洋学部的岛村智子老师的指导下开发而成 。 1) T. Shimamura et al., Anal. Sci., 2014, 30, 717-721
操作时间大幅缩短 DPPH和Trolox在溶液状态下都不稳定,需要现配现用。特别是作为底物的DPPH,一般还需要检测吸光度来确定含量,因此操作的步骤和时间都十分冗长。本试剂盒已经将所需的试剂准备好并分成小份单独包装,检测前只需要溶解定容即可开始实验,大幅缩短了操作步骤和时间。(DPPH的溶解需要超声波振荡发生器) 检测原理 检测步骤 将试剂盒样品加至96孔板,培养30分钟后即可上机检测。 将试剂盒样品加至96孔板,培养30分钟后即可上机检测。 检测结果不受各因素影响 用DPPH法检测抗氧化能力的时候,溶液中的pH以及溶剂的浓度等因素会对检测结果产生影响。本试剂盒通过优化操作步骤、调整溶液添加顺序等方法抑制pH和溶剂浓度对检测结果的影响。 pH对检测结果的影响 样品溶剂对检测结果的影响 试剂盒内含的Assay Buffer可以保证检测反应在一定 样品量只占检测溶液体积的1/10(20 μl),因此样品的 的pH下进行。 溶剂无论是水还是无水乙醇,都不影响最终检测结果。
IC50值的复孔差 如果只用样品的抗氧化能力IC50值来评价,比较容易出现检测结果的波动。用标准物质(Trolox)和样品同时检测,通过Trolox等价活性值(TEAC)来评价的话,可以得到重现性高的检测结果。 TEAC( μg TE/μg)= Trolox IC50 (μg/ml)/ Sample IC50( μg/ml)
检测例 不同检测机构之间的检测结果的差异 下面3个不同的检测机构,使用本试剂盒检测已知的抗氧化物:没食子酸、儿茶酸、桑色素。用比色皿通过分光光度计检测Trolox等价活性值(TEAC),结果显示3个检测机构之间的检测结果基本上没有差异。 参考文献:T. Shimamura et al., NipponShokuhin Kagaku Kogaku Kaishi, 2007, 54, 482 - 487 分光光度计和酶标仪检测结果的一致性 按照上面的实验的同样的方法,改用酶标仪和96孔板进行检测并计算Trolox等价活性值(Trolox),检测结果也高度一致。
参考文献 1、Enjuro Harunari, Chiaki Imada, Yasuhiro Igarashi, "Konamycins A and B and Rubromycins CA1 and CA2, Aromatic Polyketides from the Tunicate-Derived Streptomyces hyaluromycini MB-PO13T", J. Nat. Prod., 2019, 82, (6), 1609-1615. 2、Hiroki Ishida, Naoki Yamasaki, Yuuki Otsuka, Daichi Mori, Tomoko Shimamura, Takuya Hasegawa, Shuhei Ogo, Tadaharu Ueda, "Electrochemical Antioxidant Capacity Measurement: A Downsized System and Its Application to Agricultural Crops", Anal. Sci., 2021, doi:10.2116/analsci.21P217. 3、M. A. Maky and T. Zendo, "Generation and Characterization of Novel Bioactive Peptides from Fish and Beef Hydrolysates", Appl. Sci., 2021, doi:10.3390/app112110452. 4、S. Kato, K. Kuwata, "Pro-/anti-oxidative properties of dopamine on membrane lipid peroxidation upon X-ray irradiation", Radiat. Phys. Chem., 2021, doi:10.1016/j.radphyschem.2021.109518. 5、F. F. Sofian, N. Kikuchi, T. Koseki, Y. Kanno, S. Uesugi, Y. Shiono, "Antioxidant p-terphenyl compound, isolated from edible mushroom, Boletopsisleucomelas", Biosci., Biotechnol., Biochem., 2022, doi:10.1093/bbb/zbab224. 6、S. Jin, S. Kim, D. S. Kim, D. Son and M. Shin, "Optically Anisotropic Topical Hemostatic Coacervate for Naked-Eye Identification of Blood Coagulation", Adv. Funct. Mater., 2022, doi:10.1002/adfm.202110320. 7、Mohamed Abdelfattah Maky,Takeshi Zendo,“Identification of a Novel Bioactive Peptide Derived from Frozen Chicken Breast Hydrolysate and the Utilization of Hydrolysates as Biopreservatives“,Bioactive Peptides in Health and Disease【A special issue of Biology (ISSN 2079-7737).】,2023,doi.org/10.3390/biology12091218 FAQ
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