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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
33
- 生长状态:
贴壁生长
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 规格:
T25培养瓶
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 人脂肪干细胞 | T25瓶 | LZ-YX9888 |
含量:>1x10^6 细胞数
规格:T25瓶
用途:仅供科研使用。
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。备注:该细胞为悬浮并部分聚团生长
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×105~1×10^6个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
| BxPC-3细胞,人原位胰腺腺癌细胞 人皮肤纤维微细胞系,Malmc细胞 小鼠浆细胞瘤;MPC-11 | 少突胶质前体细胞培养基OPCM |
| 人脑微血管内皮细胞 | 三酸腺苷受体受体P2X3抗体 |
| 人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株;7WML6.0 | CD312抗体 |
| 小鼠红白血病细胞;MEL 小鼠气管平滑肌细胞完全培养基 100mL | 白介素1受体9抗体 |
| HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) | 细胞周期蛋白依赖性激酶CABLES2抗体 |
| IGSF8 Others Mouse 小鼠 PGRL / IGSF8 人细胞裂解液 (阳性对照) | 颗粒细胞分化蛋白抗体 |
| SK-BR-3细胞,人癌细胞 草鱼肾细胞系,GIK细胞 肺大静脉平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml) | 碳酸酶1抗体 |
| CPB1 Others Mouse 小鼠 CPB1 / PCPB 人细胞裂解液 (阳性对照) | 眼发育相关基因蛋白ODAG抗体 |
| MKN-28(人胃癌高转移细胞) 5×106cells/瓶×2 脑微血管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml) | 酸化Bcl-xL蛋白抗体 |
| CD2 Others Mouse 小鼠 CD2 / LY37 人细胞裂解液 (阳性对照) | 核仁蛋白C23抗体 |
| COLEC10 Others Mouse 小鼠 COLEC10 人细胞裂解液 (阳性对照) | Duffy血型趋化因子受体抗体 |
| CM-H101新生儿表皮角化细胞完全培养基100mL | 转化蛋白p21抗体(原癌基因H-ras抗体) |
| 人脂肪干细胞SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人细胞裂解液 (阳性对照) | CUTL1蛋白抗体 |
| 前列腺上皮细胞培养基PEpiCM | 转染抑癌基因KLF6抗体 |
| IGFBP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP2 人细胞裂解液 (阳性对照) | 20号染色体开放阅读框141抗体 |
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文献和实验脂肪干细胞的应用脂肪组织是人体内含量十分丰富的组织。随着肥胖症患者的增多,人类脂肪开始“富余”,并渐成为累赘。人们一直以为,脂肪仅仅只有储存热量作用,过量储存会导致脂肪肝、血管硬化。殊不知,脂肪还蕴藏有十分稀缺的干细胞资源。Zuk等人将脂肪抽吸术后的脂肪细胞(processed lipoaspirate cell,PLA)收集、消化后进行体外培养研究。经过不同的细胞因子的诱导,PLA能够向骨、软骨、骨骼肌、脂肪、神经等组织转化。PLA经转化后细胞表面的CD标记物与骨髓干细胞的诱导分化标记
短梭状),24小时后第一次换液,以后3天换液一次。培养3-4天时,细胞生长繁殖,细胞数量增加,并可见细胞形成孤立小片(细胞岛),逐渐扩展,细胞透明,颗粒啥,界线清晰。7-10天细胞已基本铺满瓶壁形成致密单层,(80%融合后)可进行传代培养。 3. 细胞传代培养 (1)操作步骤 a. 取一瓶脂肪干细胞在倒置相差显微镜下观察,培养细胞如长成致密的单层,即可进行传代。 b. 将培养瓶带人超净工作台,倒去细胞培养液,吸取2ml-3ml PBS加入培养瓶中,轻轻振荡后倾去,可重复进行
mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中,37℃,50 mL/L CO2培养箱中孵育。(5)48 h后首次换液,弃去悬浮细胞. 随后每3天换液,1周后传代. 将第3代细胞用于流式细胞仪检测. 浓集细胞到109/L后进行流式细胞仪检测。(6)细胞传至第3代时将其以2×107/L的细胞数分别转入各定向培养基中进行培养. 诱导培养2周后,对成脂诱导组进行油红O脂肪颗粒染色。现在脂肪干细胞缺乏特异的表面标志鉴定,各类文献提到脂肪干细胞表达阳性的标志物有:cd13,cd29,cd
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