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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
33
- 生长状态:
贴壁生长
- 规格:
T25培养瓶
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 人肾脏微血管内皮细胞 | T25瓶 | LZ-YX9446 |
含量:>1x10^6 细胞数
规格:T25瓶
用途:仅供科研使用。
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。备注:该细胞为悬浮并部分聚团生长
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×105~1×10^6个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
| 人牙龈成纤维细胞HGF | 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C2 II型胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL |
| BRL 3A, 大鼠肝正常细胞 人小细胞肺癌,NCI-H209细胞 HIT-T15(仓鼠beta胰岛细胞) | γ谷氨酰转肽酶2重链抗体 |
| IL2RA Others Mouse 小鼠 IL2RA / CD25 人细胞裂解液 (阳性对照) | 脑瘤相关基因抗体 |
| 巨噬细胞培养基MaM | 环指蛋白160抗体 |
| B16瘤 黑色素瘤 | 粒体二羧酸载体蛋白抗体 |
| TNFSF13B Protein Human 重组人 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白 | 多药耐药相关蛋白3抗体 |
| CL-0396NCI-H226(人肺鳞癌细胞)5×106cells/瓶×2 | 受体相互作用蛋白激酶1抗体 |
| 小鼠肠静脉内皮细胞完全培养基 100mL | 酸化GATA结合蛋白6抗体 |
| 大鼠软骨细胞完全培养基 100mL | 整合素α2抗体 |
| 615小鼠网织细胞性白血病瘤株;L615 | 成纤维细胞生长因子20抗体 |
| LIF Protein Human 重组人 LIF 蛋白 (Fc 标签) | 溶血0脂酸酰基转移酶D抗体 |
| marc-145猴胚胎肾上皮细胞 Marc-145 monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM+10% FBS | 紧密连接蛋白3抗体 |
| 人肾脏微血管内皮细胞IFNA13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 蛋白 (His 标签) | 氧化蛋白质水解酶 |
| COS-1非洲绿猴SV40转化的肾细胞 Renal cell COS-1 in African green monkey SV40 ansformation DMEM培养基+10%FBS | 干细胞转录因子NANOGP8抗体 |
| NCI-N87 [N87]人胃癌细胞 Human | 唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素抗体 |
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文献和实验脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的重要成分,与外周血管内皮细胞不同,它具有高跨内皮阻抗(transendothelial electrical resistance,TER)、细胞间紧密连接、极少的胞饮小泡、缺乏窗孔结构以及含有选择性双向跨细胞膜转运系统等独有的特征,从而使血脑屏障形成一个限制大多数极性分子和蛋白质运动的选择性低渗透性的屏障[1]。由于体外培养的脑微血管内皮细胞保持了较多的其体内固有的特点[1],因此目前脑微血管内皮细胞
原代微血管内皮 细 胞( Primary Microvascular Endothelial Cells )的体外分离培养 微血管内皮细胞生长因子的应用和免疫磁珠技术的发展,使微血管内皮细胞的培养和纯化变得相对简化。 1、微血管内皮细胞培养简述人体主要器官和组织的微血管内皮细胞已经培养成功的有:骨骼肌、心、脑、胃、视网膜、肺、皮肤、脉络膜、小肠、脂肪、肝窦、肾、关节滑膜、胎盘、骨髓、胰岛、角膜及食道等器官组织的微血管内皮细胞。 2、微血管内皮细胞的分离目前分离内皮细胞的方法主要有三种
。经孔径为110μm尼龙筛网过滤,将滤液以4000r/min离心10min; 4. 弃离心后的上清液。给沉淀加入15%右旋糖苷溶液,重新悬浮沉淀。然后,再以4000r/min离心20min。收集微血管片段; 5. 用0.05%胶原酶溶液消化2—4h。用Hanks液洗涤并离心,给微血管片段加入M199培养液; 6. 接种到培养瓶中,置37℃、5%CO2 的培养箱中(湿度100%)培养 7. 24h后换液,将未贴壁的微血管段移入其它培养瓶或皿中继续贴壁生长。之后,每3d换液
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