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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
黄绿青霉探针法荧光定量PCR试剂盒
- 保质期:
6个月
- 供应商:
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件:
避光低温保存
- 规格:
50次
黄绿青霉探针法荧光定量PCR试剂盒
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据黄绿青霉高度保守区设计,不会跟其他病毒 DNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品由酶联生物提供,不得用于临床诊断。
规格及成分:
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL(本色盖) |
| 试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL(黄盖) |
| 试剂三 | 黄绿青霉qPCR引物混合液 | 100μL(白盖) |
| 试剂四 | 黄绿青霉qPCR探针 | 50μL(棕色管) |
| 试剂五 | 黄绿青霉探针法qPCR阳性对照(1×10E8/μL) | 50μL(红盖) |
| 使用手册 | 1 份 | |
一、稀释标准曲线样品:(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。
6. 放冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
黄绿青霉探针法荧光定量PCR试剂盒
二、样品DNA的制备:
7. 如果有 N 个样品,设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
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文献和实验相关专题 实验室很多同学都要做Real time PCR实验,实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见,不过也有实验室前没有做过的,查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。 荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物,探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高。目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针(荧光共振能量传递探针)和分子
所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率,把引物二聚体调整到越小越好;探针法则需要设计荧光探针,这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个:完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上;这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置,根据自己试验情况而定,本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
,5% CO2条件下,保存于加有1%左旋谷氨酰胺、1%青霉素/链霉素、 10% FBS(GIBCO-BRL)、潮霉素(100μg/ml)和G418(geneticin,250μg/ml)的DMEM(GIBCO-BRL)中。 用40 nM siRNA转染细胞,转染48小时后,用TNF-α(33 ng/ml)刺激细胞。RNA分离和逆转录用RNeasy试剂盒在两个独立反应(每个siRNA 2个生物学重复)中从1×107 HLR-CHOP细胞提取总RNA。每次用700 ng总RNA,以及根据厂家指导手册采用寡脱氧
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