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1H,1H,2H,2H-全氟癸基磷酸纳
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10
- 供应商：
贝万塔
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N/A
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赛默飞；ChemService；AOCS;sigma;chiron;PSS;TCI;麦克林；阿拉丁；buchem等
将其稀释至 1 mg/mL 以降低缓冲体系中去污剂的浓度（但对于那些在细胞中表达水平较低的蛋白而言，10 mg/mL 这样更高的浓度可能对免疫沉淀更有效一些）。 加入推荐体积的免疫沉淀抗体至 500 µL 细胞裂解液中与目标蛋白反应。（抗体的最适用量要根据每一细胞模型中免疫沉淀靶蛋白的数量来确定）。 将细胞裂解液与抗体轻轻混匀后孵育 2h，或 4℃ 缓慢振荡过夜。（选择孵育 2h 常用于免疫沉淀与激酶或磷酸酯酶作用的活化酶。）加入100 µL Agarose protein A+G 轻轻振荡 1h
1.3.1.偶联时间：2h 1.3.2.封闭时间：1h 1.4. 封闭要求：封闭时间不宜小于1h。 2. 偶联流程 2.1. 配制偶联实验所用的缓冲液，分别有以下几种： 2.1.1 偶联液：100mM MES pH4.8 2.1.2 封闭液：3M Ethanolamine，1%BSA，0.5%T-20，pH8.0 2.1.3 保存液：0.05%proclin-300的PBS缓冲液或者根据自己的需求配制其他缓冲液。 2.2. 先将磁珠用旋涡
的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。方法： 收集细胞→PBS洗涤→抽提细胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE电泳→硝酸纤维素膜或PVDF膜转移→5%脱脂奶粉封闭，室温1.5~2h或4°C过夜→Caspase-3多抗或单抗室温反应1~2h或4°C过夜→TBS-T（含0.05% Tween 20的TBS）洗3次，5~10min/次→HRP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1~2h→ TBS-T洗3次
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