潮霉素B （适用于细胞培养）31282-04-9

潮霉素B （适用于细胞培养）31282-04-9 潮霉素B （适用于细胞培养）31282-04-9
产品名称：潮霉素B 31282-04-9
产品编号：A2138
中文别称 湿霉素乙 效高素 潮霉素B干粉
英文别称 Hygromycin B
CAS 31282-04-9
储存条件 -20℃
有效期 4年
溶解性 100mg/ml in Water
来源 放线菌发酵产品
纯度 >90%
酶活/效价 ≥950U/mg
性状 白色至浅黄色固体
包装 瓶
规格 1g
本品是潮霉素B干粉，（潮霉素B液体请联系客服）用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水，PBS溶液。
说明：蛋白质合成抑制剂，可用于植物细胞培养等生化研究。
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌（ Escherichia coli.）来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418 ，Zeocin和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
使用方法
1.  常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度（μg/mL）	培养基体积（ml）	5mg/ml潮霉素B加入体积（ml）
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3.   稳定转染细胞的筛选
1）     转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2） 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4） 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5） 之后更换正常培养基培养即可。
This product is hygromycin B dry powder (please contact customer service for hygromycin B liquid). It is used for cell culture experiments, dissolution, filtration, and sterilization. Recommended solvent water, PBS solution.

Explanation: Protein synthesis inhibitors can be used for biochemical research such as plant cell culture.

Hygromycin B is an aminoglycoside antibiotic produced by Streptomyces hygroscopicus metabolism. It inhibits protein synthesis by interfering with 70S ribosomal translocation and inducing misreading of mRNA templates, thereby killing prokaryotic (such as bacteria), eukaryotic (such as yeast, fungi), and higher mammalian eukaryotic cells.

The hygromycin resistance gene (hyg or hph) derived from Escherichia coli encodes hygromycin B phosphotransferase, which converts hygromycin B into non biologically active phosphorylated products, thereby playing a detoxifying role. Based on this principle, hygromycin B is a very useful selective marker for screening and maintaining cultured prokaryotic or eukaryotic cells successfully transfected with hygromycin resistance genes. In addition, due to differences in the mode of action, it is often used in combination with G418, Zeocin, and Blastimidin S for the selection of dual resistance positive cell lines. Hysteromycin B can also be used as an antiviral agent, as it selectively penetrates into cells that enhance permeability due to viral infection and has an inhibitory effect on translation. It can also be mixed into animal feed to achieve insect repellent function.

Usage

1. Common screening concentrations

Note: The working concentration of hygromycin B for screening stable transgenic strains needs to vary according to cell type, culture medium, growth conditions, and cell metabolic rate. It is recommended to use a concentration of 50-1000 μ G/mL. For the experimental system used for the first time, it is recommended to establish a kill curve, i.e. a dose-response curve, to determine the optimal screening concentration.

Generally speaking, mammalian cells range from 50 to 500 μ G/mL; Bacteria/Plant Cells 20-200 μ G/mL; Fungi 300-1000 μ G/mL.

2. Establishment of killing curve

Note: In order to screen cell lines with stable expression of the target protein, it is necessary to determine the minimum concentration of antibiotics that can kill non transfected host cells. This can be achieved by establishing a killing curve (dose-response curve), selecting at least 5 concentrations.

1) On the first day: Untransformed cells were laid on suitable culture plates with a cell density of 20-25%, and incubated overnight at 37 ℃ in CO2; Note: For cells that require higher density for vitality detection, the inoculation amount can be increased.

2) Set a concentration gradient within an appropriate range based on cell type. Taking mammalian cells as an example, 501002505007501000 can be set μ G/mL. First, dilute the mother liquor to 5 mg/ml using deionized water or PBS buffer in a 1:10 ratio, and then dilute it to the corresponding concentration of the working solution according to the table below.

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