胶体金标记-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG)

胶体金标记物的制备

金溶液选用15000r/min 4℃离心15min，吸出上清，弃去沉淀，以去除大的聚合物。 （2）一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心，小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心，在4℃离心1h左右，弃上清，将沉淀以原体积的0.02mol./L TBSpH8.2（内含1%BSA，0.05%叠氮钠）溶解，重复离心2～3次，沉淀溶于原体积的1/10TBS中。4℃保存备用。为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂，上述粗提制剂可用10%～30%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心，分带收集不同大小颗粒的胶体金标记

胶体金标记蛋白质的纯化

标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。（一）超迷离心法根据胶体金颗粒大小不同及蛋白质种类不同，离心的转速和时间也不同。用牛血清白蛋白稳定的胶体金标记羊抗兔IgG,可先从低速离心（20nm颗粒用250g;5nm用4800g20min），弃去聚集的金颗粒所形成的沉淀，然后将上清液5nm金标记物用60000g于4℃离心

免疫胶体金检测不孕症患者血清EMAb

期子宫内膜，剪碎，与2.5g/L胶原酶共育，37℃2.5h后用250μm、40μm不锈钢筛依次过筛，用PBS洗净后收集筛网上子宫内膜腺体，玻璃匀浆器匀浆后，4℃电磁搅拌1h，高速离心30min弃沉淀，上清液用抗人血清抗体Sepharose4B免疫吸附柱除去人血清成分，双缩脲法定量蛋白质为22.6g/L，10倍稀释后低温箱保存备用。2、材料 金标记羊抗人IgG由卫生部上海生物制品研究所提供，胶体金颗粒购自华美生物工程公司。硝酸纤维素膜购自上海生物医学公司。血清标本来源：河南省南阳市中心医院及南阳市计划