胶体金标记-山羊抗人IgG (Fab特异性)

胶体金标记物的制备

胶体金标记蛋白质的原理，一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时，蛋白质呈电中性，此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小，但蛋白质分子的表面张力却最大，处于一种微弱的水化状态，较易吸附于金颗粒的表面。由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态，如果＝低于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷，胶体金带负电荷，二者极易静电结合形成大的聚合物。如果pH高于蛋白质等电点时，蛋白质带负电荷，与金颗粒的负电荷相互排斥而不能互相

胶体金标记技术

银染色法（Dot-Immuno-Gold-Silver Straining Method，Dot-IGSS），利用NC膜可以与带负电荷的蛋白质产生较强的疏水作用，从而使目标蛋白与NC膜产生较强亲和力的特性，以及NC膜易于被封闭的特点，使用NC膜作为固相载体。先使被FMDV免疫过的牛血清（含FMDV抗体蛋白）与NC膜结合，然后使用合适的封闭液将NC 膜未结合蛋白的位点封闭，再用胶体金标记过的抗FMDV抗体蛋白的二抗与FMDV免疫过的牛血清作用（利用抗原抗体的特异性结合反应），将未特异性结合的蛋白

胶体金标记的影响因素

其等电点，标记物一般不会与胶体金解离（啥，您要试试p H 14的？！ ）。如果您加入盐，胶体金仍然能保持一颗红心不变的。此类标记物疏水相互作用/配位键>静电斥力，其分子量一般比较大，如抗体。当然，缓冲体系就比较好办了。3、 标记物的量按照常规的方法，最低稳定量+10-20%是好的，但俺们认为您最好做一下功能性实验（灵敏度，稳定性），可能您会发现再多加一些蛋白，如抗体，其灵敏度和稳定性会更好一些。这是因为在浓度高的情况下标记，抗体倾向与利用F c片段与胶体金结合，这样就有较多Fab片段处于游离