- ￥3990
- mlBio/酶联生物
- mlE12262
- 国内
- 2025年10月31日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
口腔支原体探针法荧光定量PCR试剂盒
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光低温保存
- 规格：
50次
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据口腔支原体高度保守区设计，不会跟其他病毒 DNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品由酶联生物提供，不得用于临床诊断。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL(本色盖) |
| 试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL(黄盖) |
| 试剂三 | 口腔支原体qPCR引物混合液 | 100μL(白盖) |
| 试剂四 | 口腔支原体qPCR探针 | 50μL(棕色管) |
| 试剂五 | 口腔支原体探针法qPCR阳性对照(1×10E8/μL) | 50μL(红盖) |
| 使用手册 | 1 份 | |
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂：
样品DNA。
口腔支原体探针法荧光定量PCR试剂盒
使用方法：
一、稀释标准曲线样品：（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。
6. 放冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备：
7. 如果有 N 个样品，设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）：
| 成份 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照管 | 标准曲线样品管(2-7管) |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 口腔支原体qPCR探针 | 1μL | 1μL | 各1μL |
| 口腔支原体探针法qPCR引物混合液 | 2μL | 2μL | 各2μL |
| N+2个待测DNA模板 | 7μL | -- | -- |
| 超纯水 | -- | 7μL | -- |
| 第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号) | -- | -- | 各7μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min |
| PCR 反应（40个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min（采集FAM通道的荧光信号） |
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。若重复结果 Ct值小于 40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
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文献和实验为阴性的细胞） 使用该试剂盒还有一些 ↓ 注意事项 1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书全文。 2 为保证结果可靠性，建议每次实验都有阳性和阴性对照，每个反应各加4μl，阳性对照随试剂盒提供，阴性对照为灭菌ddH2O，需客户自己准备。 3 操作时应尽量少说话，或带口罩，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性。 4 细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响检测结果，如果用户需要进一步提高检测灵敏度，建议用不含双抗
研究1、 产前诊断：人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。2、 病原体检测：采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测
对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95％以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.laidlawii），为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常
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