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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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23
- 英文名:
Recombinant Interferon Alpha 4 (IFNa4)
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20度
- 规格:
10µg50µg 200µg 1mg 5mg
| 产品名称 | 人干扰素α4(IFNa4)重组蛋白 |
| 货号 | LZ-D6733 |
| 规格 | 10µg50µg 200µg 1mg 5mg |
| 物种 | Homo sapiens (Human,人) |
英文别名:INFA4; Interferon Alpha-4B; Interferon Alpha-76; Interferon Alpha-M1
物种:Homo sapiens (Human,人)
来源:原核表达
宿主:E.coli
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位:分泌
预测分子量:18.9kDa
实际分子量:20kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Ala10~Ala163 with N-terminal His Tag
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 95%
等电点:5.6
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10µg50µg 200µg 1mg 5mg
重组蛋白表达体系分析:
(一)原核表达系统
原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。其中最常用的表达系统主要是大肠杆菌表达系统。卡梅德生物通过每年多达400个原核蛋白制备项目的技术积累拥有一套完整的蛋白表达和纯化方案,为客户提供优质服务。
(二)酵母表达系统
酵母是一种真核微生物,其细胞有表达外源蛋白的能力,可以达到一个相当高的胞密度状态,在酵母中表达外源蛋白可以进行翻译后修饰,如磷酸化和糖基化。由于酵母宿主细胞结合了细菌和高阶生物宿主细胞表达系统的优良特性,当外源蛋白未能成功地在大肠杆菌中表达时,它是一个不错的选择。用于外源蛋白表达的酵母菌株包括酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁维酵母。卡梅德生物拥有丰富的酵母蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户定制酵母表达策略。
(三)昆虫细胞表达系统
膜蛋白、大分子质量蛋白和蛋白激酶这些很难用细菌表达系统表达的蛋白,在Sf9或High-5等昆虫细胞中实现了表达。在大多数昆虫细胞表达系统中,外源基因通过杆状病毒载体转染宿主细胞,含有目标基因的标记盒通过同源重组并入宿主基因组中。卡梅德生物可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,免费对客户提供的基因进行序列分析,据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。
(四)哺乳动物细胞表达系统
当含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白不能使用其他表达系统表达时,哺乳动物细胞可表达外源蛋白。常用的外源蛋白表达的哺乳动物细胞系包括海拉(Hela)细胞、人胚肾细胞(HEK293)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系,包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系,配合卡梅德设计的高表达载体(含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列),能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。
| ELISAKitαManase人α甘露糖苷酶规格:48T/96T | CLEC14A重组小鼠 CLEC14A / EGFR-5 蛋白 (His 标签) Protein |
| 大鼠抗酸性0酸酶(ACP5)ELISA试剂盒 ,英文名: ACP5 ELISA Kit | ALDH3A1 Protein Human 重组人 ALDH3A1 蛋白 (His 标签) |
| Monkey glial fibrillary acidic protein (GFAP) ELISA Kit神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒 | PHOSPHO1重组人 PHOSPHO1 蛋白 (His 标签) Protein |
| RaeninELISAKit 大鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 | SERPINE1 Protein Rat 重组大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (His 标签) |
| CLIAKitforFree-T3(MouseFreei-iodothyronineIndes)ELISAKit小鼠游离三甲状腺原氨酸规格:48T/96T | CD14(cluster of differentiation antigen 14 0.5mgCD14(cluster of differentiation antigen 14) CD14/内毒素受体抗原 |
| Chemokine T cells induced by ierferon (ITAC/CXCL11) ELISA Kit 人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)ELISA试剂盒 | SIGLEC5 Protein Human 重组人 SIGLEC5 蛋白 (Fc 标签) |
| rabbitDehydroepiandrosteronesulfate,DHEA-SELISAKit 兔子脱轻表雄硫酸酯(DHEA-S)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 | SELL重组人 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His 标签) Protein |
| CLIAKitforAZT(MouseAzidothymidine)ELISAKit小鼠叠氮胸苷规格:48T/96T | C1QBP Protein Mouse 重组小鼠 HABP1 / C1QBP 蛋白 (His 标签) |
| 线虫同步化生长培养试剂盒10次 | IL1RN重组人 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 标签) Protein |
| RabbitapoproteinA1,apo-A1ELISAKit兔载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒规格:96T/48T | ACVRL1 Protein Canine 重组狗 ALK1 / ACVRL1 蛋白 (Fc 标签) |
| 人CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 | PVRL1重组大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 (His 标签) Protein |
| 兔内皮型合成酶(eNOS)免疫试剂盒 Rabbit Endothelial niic oxide syhase,eNOS ELISA Kit | GLP-1R peptide 胰高血糖素样肽-1受体多肽 0.5mgGLP-1R peptide 胰高血糖素样肽-1受体多肽 |
| RabbitIerleukin1,IL-1ELISA试剂盒兔子白介素1(IL-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T | TNFRSF17 Protein Human 重组人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 蛋白 (His & Fc 标签) |
| 糖转运蛋白3(GL3)ELISA试剂盒 ,英文名: GL3 ELISA Kit | 人干扰素α4(IFNa4)重组蛋白丝蛋白结合LIM蛋白1(FBLIM1)重组蛋白 Recombinant Filamin Binding LIM Protein 1 (FBLIM1) |
| Humanai-Sa-aibodyELISA试剂盒人抗Sa抗体(ai-Sa-Ab)ELISA试剂盒规格:96T/48T | FZD10重组人 Frizzled-10 / FZD10 蛋白 (His 标签) Protein |
IPTG浓度
有可能,宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到,你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),一种乳糖类似物,控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期,即当溶液的波长600(OD 600)处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质,最好不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此,使用高浓度的IPTG(> 1mM)可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度,看看哪一个给你最高的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔,你可以在37°C的典型温度下,通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质,但通常情况下,溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C,25°C和18°C下进行诱导。 注意:如果首先在37℃生长,先让培养物冷却到诱导温度,再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间,每隔几个小时取样,并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化:对于37℃,尝试4小时;对于30℃,进行5-6小时,并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。
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文献和实验,或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α(+)载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统,可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价,快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大,因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中,我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α(+)载体的构建,蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应(PCR
年耿信笃教授首先将高效疏水相互作用色谱(HPHIC)用于变性蛋白的复性,很好的解决了上述问题,现已成功用于重组人干扰素-g(rhIFN-g)、重组人干扰素-a(rhIFN-a)、人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、重组人胰岛素原(proinsulin)、重组牛朊病毒(prion)等重组蛋白以及溶菌酶和核搪核酸酶等标准模型蛋白的复性与同时纯化中。目前,排阻色谱法、离子交换色谱法和亲合色谱法也已用于蛋白质的复性和同时纯化中。与传统的稀释法及透析法比较,用色谱法进行蛋白复性的优点是:①在进样后可很快
源途径和产生 Aβ的淀粉源途径,在第一条水解途径中,APP 的蛋白水解及分泌需经过α-分泌酶作用,产生可溶性α-APPs 并释放到胞外,同时留下 APP 的α-CTF 或 C83(C-terminal fragment,CTF),C83 能被γ-分泌酶进一步剪切,产生 APP 胞内端 AICD 和不会聚集的 p3 肽段 [3]。因这一过程破坏了 Aβ的完整结构,无神经毒性,该过程称为非淀粉样蛋白生成途径,在正常情况下,该代谢途径占优势。 Aβ是经由淀粉样蛋白途径生成
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