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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
47
- 英文名:
Recombinant Transforming Growth Factor Alpha (TGFa)
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20度
- 规格:
10µg50µg 200µg 1mg 5mg
| 产品名称 | 人转化生长因子α(TGFa)重组蛋白 |
| 货号 | LZ-D6716 |
| 规格 | 10µg50µg 200µg 1mg 5mg |
| 物种 | Homo sapiens (Human,人) |
英文别名:ETGF; TGF-A; Protransforming Growth Factor alpha; EGF-Like TGF
物种:Homo sapiens (Human,人)
来源:原核表达
宿主:E.coli
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位:分泌
预测分子量:11.8kDa
实际分子量:13kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Glu24~Ala98 with N-terminal His Tag
缓冲液成份:100mM NaHCO3, 500mM NaCl缓冲液(pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 97%
等电点:6.6
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10µg50µg 200µg 1mg 5mg
重组蛋白表达体系分析:
(一)原核表达系统
原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。其中最常用的表达系统主要是大肠杆菌表达系统。卡梅德生物通过每年多达400个原核蛋白制备项目的技术积累拥有一套完整的蛋白表达和纯化方案,为客户提供优质服务。
(二)酵母表达系统
酵母是一种真核微生物,其细胞有表达外源蛋白的能力,可以达到一个相当高的胞密度状态,在酵母中表达外源蛋白可以进行翻译后修饰,如磷酸化和糖基化。由于酵母宿主细胞结合了细菌和高阶生物宿主细胞表达系统的优良特性,当外源蛋白未能成功地在大肠杆菌中表达时,它是一个不错的选择。用于外源蛋白表达的酵母菌株包括酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁维酵母。卡梅德生物拥有丰富的酵母蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户定制酵母表达策略。
(三)昆虫细胞表达系统
膜蛋白、大分子质量蛋白和蛋白激酶这些很难用细菌表达系统表达的蛋白,在Sf9或High-5等昆虫细胞中实现了表达。在大多数昆虫细胞表达系统中,外源基因通过杆状病毒载体转染宿主细胞,含有目标基因的标记盒通过同源重组并入宿主基因组中。卡梅德生物可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,免费对客户提供的基因进行序列分析,据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。
(四)哺乳动物细胞表达系统
当含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白不能使用其他表达系统表达时,哺乳动物细胞可表达外源蛋白。常用的外源蛋白表达的哺乳动物细胞系包括海拉(Hela)细胞、人胚肾细胞(HEK293)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系,包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系,配合卡梅德设计的高表达载体(含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列),能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。
| HumanMothersagainstdecapeaplegichomolog7,Smad7ELISA试剂盒人Smad7ELISA试剂盒规格:96T/48T | BST1重组小鼠 CD157 / BST1 蛋白 (His 标签) Protein |
| Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T | KDR Protein Human 重组人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (His 标签) |
| 大鼠抗血小板抗体IgA(PA-IgA)ELISA试剂盒 ,英文名: PA-IgA ELISA Kit | FUT8重组人 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 标签) Protein |
| 人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA检测试剂盒HumanL-SelectinELISAkit 96T/48T | IL9 Protein Rat 重组大鼠 IL9 / IL-9 蛋白 (His 标签) |
| Chloramphenicol(氯霉素)免疫试剂盒 Chloramphenicol ELISA Kit | CD33 peptide(human 0.5mgCD33 peptide(human) CD33抗原(人) |
| 豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒 ,英文名: MCP-4/CCL13 ELISA Kit | CLPS Protein Human 重组人 CLPS / Colipase 蛋白 (His 标签) |
| Human dopamine decarboxylase (DDC) ELISA Kit 人多巴胺脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒 | FABP2重组人 FABP2 / I-FABP 蛋白 (His 标签) Protein |
| rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 | CLEC14A Protein Rat 重组大鼠 CLEC14A / EGFR-5 蛋白 (Fc 标签) |
| CLIAKitforBetaOHBELISAKit大鼠β规格:48T/96T | BIRA重组大肠杆菌 Bifunctional protein BirA (His & MBP 标签) Protein |
| 细菌脱氧胆酸盐琼脂平板50个 | CHEK2 Protein Mouse 重组小鼠 CHK2 / CHEK2 蛋白 (His & GST 标签) |
| Humanc-fosELISAKit人c-fosELISA试剂盒规格:96T/48T | RBP4重组小鼠 RBP4 蛋白 (His 标签) Protein |
| 人CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 | BKCa channels(calcium-activated potassium channel 0.5mgBKCa channels(calcium-activated potassium channel) 钙激活通道蛋白 |
| 前列腺素E1(PGE1)ELISA试剂盒 ,英文名: PGE1 ELISA Kit | TMED4 Protein Human 重组人 TMED4 / ERS25 蛋白 (Fc 标签) |
| 兔神经肽Y(NPY)免疫试剂盒 Rabbit neuropeptide Y,NPY ELISA kit | 人转化生长因子α(TGFa)重组蛋白TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha 0.5mgTNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha) 人坏死因子-α(多肽抗原) |
| rabbitHistamine,HISELISA试剂盒兔子组胺(HIS)ELISA试剂盒规格:96T/48T | MAPK9重组人 JNK2 / MAPK9 蛋白 (His 标签) Protein |
IPTG浓度
有可能,宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到,你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),一种乳糖类似物,控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期,即当溶液的波长600(OD 600)处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质,最好不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此,使用高浓度的IPTG(> 1mM)可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度,看看哪一个给你最高的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔,你可以在37°C的典型温度下,通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质,但通常情况下,溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C,25°C和18°C下进行诱导。 注意:如果首先在37℃生长,先让培养物冷却到诱导温度,再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间,每隔几个小时取样,并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化:对于37℃,尝试4小时;对于30℃,进行5-6小时,并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。
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文献和实验牢记N端法则:当N端第二个残基是Leu、Arg、Lys、Phe、Tyr和Trp时,重组蛋白半衰期只有2分钟,而小侧链的氨基酸残基,如Ala,则可以提高蛋白稳定性。因此在设计载体时,要特别注意第二个密码子,避免上述残基的出现。处理高毒性蛋白:毒性极高的重组蛋白,其本底表达就会杀死原核宿主,质粒容易丢失,使其在大肠杆菌中很难得到高表达。采用可表达T7溶菌酶的宿主。T7溶菌酶是T7RNA聚合酶的抑制剂,采用含有T7溶菌酶质粒的宿主,如pLysS,可以降低重组蛋白在大肠杆菌快速生长期的本底
蛋白、含二硫键蛋白在体外成功复性。 包涵体形成的原因 重组蛋白在宿主系统中高水平表达时,无论是原核表达体系或真核表达体系甚至高等真核表达体系,都会形成包涵体[2]。主要因为在重组蛋白的表达过程中,缺乏某些蛋白质折叠过程中需要的酶和辅助因子,或环境不适,无法形成正确的次级键等原因形成的[3]。 1、 表达量过高,研究发现在低表达时很少形成包涵体,表达量越高越容易形成包涵体。原因可能是合成速度太快,以至于没有足够的时间进行折叠,二硫键不能正确配对,过多的蛋白间的非特异
的生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子-I(IGF-1)、IGF-II、白血病抑制因子(LIF)、神经生长因子(NGF)、抑瘤素M(OSM)、血小板衍生的内皮细胞生长因子(PDECGF)、转化生长因子-α(TGF-α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)等。 重组细胞因子是利用基因工程技术在一定的宿主细胞中表达并经过一系列分离纯化工艺制备而成的细胞因子产品,目前已经广泛用于细胞治疗等相关研究领域和医药领域,如肿瘤、感染和造血障碍等疾病的治疗
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