杭州华安 K0103 支原体PCR检测试剂盒
我们北京云肽生物科技有限公司作为 杭州华安 公司的特约经销商为客户提供,正规进口,保证原装正品,货期稳定,折扣好的服务标准。
杭州华安生物技术有限公司成立于2007年3月,总部位于中国杭州,是一家从事抗体研发与生产的高新技术企业。公司致力于为全球的科研工作者和工业客户提供高品质的抗体试剂及抗体服务。
公司的产品线包括兔单抗、小鼠单抗、兔多抗、羊驼抗体、二抗、蛋白/多肽、抗体检测用相关试剂等。2015年,公司开始专注于高通量重组兔单克隆抗体的研发与产业化生产。
同时,公司也为客户提供定制抗体的开发、纯化和筛选服务。迄今为止,公司已累计完成超过10000个定制抗体项目,涉及植物、动物、医学、水产、病毒等不同的科研领域。用户使用公司抗体在Nature、Science、Immunity、Nature Communications、Autophagy、Plant Cell、Cell Research等杂志上发表文章。
杭州华安 K0103 支原体PCR检测试剂盒,产品简介;
产品品牌:杭州华安
产品货号:K0103
产品名称:支原体PCR检测试剂盒
产品规格:20test
杭州华安 K0103 支原体PCR检测试剂盒,产品说明:
PCR Mycoplasma Test Kit可用于各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等) 支原体感染的检测。应用聚合酶链式反应技术(PCR)对支原体16s-rRNA基因保守区域的特异性片段进行扩增检测。该方法可以在数小时内得到结果,与传统的选择性培养基培养检测方法相比较,本方法更快速,灵敏度和特异性更高,不会出现由于培养法检测时大量培养支原体而可能带来的次级污染的问题。国内外研究表明,细胞培养的支原体污染中,有98%以上是由以下五种支原体引起的:M.orale、M.arginini、M.hyorhinis和A.laidlawii,M.Fermentans。本试剂盒能检测包括以上五种常见支原体在内的40种支原体。
原理
PCR检测试剂盒中含有PCR反应所需要各种试剂组分,如:引物、dNTPs、缓冲液、Taq酶、稳定剂等。PCR反应液中加入检测样品和Taq酶,即可进行PCR扩增反应。PCR扩增产物经琼脂糖电泳染色判断,阳性样本将在290bp处出现特异性条带。
使用方法
1 实验所需器材与试剂
1.1 器材
1)PCR仪
2)PCR反应管
3)电泳仪及水平电泳槽
4)高速离心机
5)微量移液器及移液器吸头
1.2 试剂
1)琼脂糖
2)DNA Marker
3)Gel-Red或其他核酸染料
4)去离子水或双蒸水
2 实验操作步骤
注: 当细胞生长至80-90%时可以取样进行检测,培养液中的青霉素和链霉素不会影响检测效果。
1. 收取待检样品(贴壁细胞:细胞生长至80%左右即可,送检细胞不能用消化液消化细胞,可以使用细胞刮刀刮取细胞;悬浮细胞:细胞生长至80%左右即可),取150ul细胞悬浮液(约1~3×105细胞数)或上述细胞上清液至离心管,沸水浴10min 。
2. 将煮沸过的检测样品12000rpm离心2-5min。
3. 取上清4ul作为PCR反应模板。
4. 充分融化PCR反应液,按下列表格配制反应混合液,并以21ul/管分装至PCR反应管中
1个反应体系 5个反应体系 20个反应体系
PCR反应液 20ul 100ul 400ul
Taq酶 1ul 5ul 20ul
5. 每个PCR反应管中加入处理好的样品4ul,DNA阳性对照和阴性对照各加入4ul/管。
6. 将所有PCR反应管放入PCR仪,参照以下参数运行PCR仪。
预变性 94℃ for 5min
循环 94℃ for 30sec
56℃ for 30sec 35 cycles
72℃ for 30sec
延伸 72℃ for 5min
保存 4℃ ∞
7. 取5ul PCR扩增产物,在1%琼脂糖凝胶上直接点样(注:无需再加溴酚蓝,扩增产物已包含溴酚蓝),120V电泳20分钟(可根据电泳仪的情况,适当调整参数)。
8. Gel-Red或其他核酸染料染色观察。
储存: 避光,保存于-20℃。
注意事项
1 使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
2 操作时应尽量少说话,因口腔中也含有支原体,可能引起样品污染,而造成假阳性;整个检测过程中,反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行,以避免交叉污染。
3 实验时,试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀(混匀时禁止激烈振荡,只需要进行上下倒置多次进行混匀)。
4 反应管中加好所有的试剂后,应尽快上PCR仪进行扩增,以免形成过多的二聚体。
5 细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测灵敏度,建议细胞在不含青霉素和链霉链等抗生素中进行培养2-3天后送样检测。
6 阴性对照是ddH2O,我们不提供阴性对照的原因是避免重复污染,所以客户每次做实验的时候需自备一管新的ddH2O。
产品订购信息:
K0103 杭州华安 支原体PCR检测试剂盒 20test