方形培养基瓶，60ml，PETG，无菌

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项

细胞，计数，并调整细胞浓度至1×107/mL。 注意事项： 一个正常大小的脾脏，根据经验大约可以得到4×107个细胞，实际细胞数以计数结果为准。 淋巴细胞约占小鼠脾脏裂解红细胞后总细胞量的60%~70%。 未染色的脾脏细胞样本，可以在荧光通道中看到少量（大约百分之零点几）非特异性信号。 若没有组织研磨棒，也可以用注射器里面的推杆替代。用推杆前端的橡皮垫研磨脾脏。 收集的脾脏细胞如需进一步培养，取小鼠脾脏时需置于无菌操作台上。如果只是做普通的流式实验，则可以不考虑无菌环境。 PBS可以用细胞染色染冲液

支原体污染的特点及检验（1）

于4℃，期限1个月。　　· 固体培养基 (1 liter )：称取21 g之Difco PPLO broth，0.02 g phenol red，15g Bacto agar于600ml蒸馏水中，加热溶解之。灭菌121℃，15分钟。放在50℃水中浴中，待温度降低至50℃时，于无菌操作台内加入200ml马血清，100ml之15% yeast extract solution 及100ml解冻之10x stock solution，混合均匀后，倒入60x50㎜之无菌培养皿中，5ml/培养皿。保存于4℃

小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项

小鼠肿瘤样本制备 颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死，75% 酒精浸泡 5 min，取出小鼠置于无菌操作台上。 左手持镊子，右手持弯剪，沿肿瘤边缘剪下长约 1cm 的口子，可清晰看见肿瘤附着于皮下，沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处，剥离肿瘤。 将剥离的肿瘤放入100 mm 的培养皿中，并在室温下加入 5~10 mL 的 1640 基础培养基。 单细胞悬液的制备 A.混合酶消化法 待所有肿瘤剥离完毕后，将肿瘤转移至 1.5 mL EP 管中，手持弯剪将肿瘤充分剪碎，边剪边加入1640基础培养基，静置数秒