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液体水分含量标准物质,1.000×10-2关键词:液体水分含量标准物质,1.000×10-2
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文献和实验色者为活细胞,染上蓝色者为死细胞。 4. 计数的换算 计完数后,需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2,高为0.01 cm,这样它的体积为0.0001 cm3,即0.1 mm3。由于1 ml=1000 mm3,所以每一大方格内细胞数×10 000=细胞数/ml,故可按下式计算: 细胞悬液细胞数/ml=4个大格细胞总数/4×10 000 如计数前已稀释,可再乘稀释倍数。 计数细胞后,计算细胞悬液浓度并求出存活与死亡细胞数的比例。 注意
;3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品,1700×g,离心 10 min。如果样品溶解得不好,再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液,重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质,重复抽提一次,将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中;4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇,12 000 rpm 离心 2 min;5. 用 70% 乙醇洗涤,晾干,沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋
2~4 h,使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连; 免疫沉淀反应后,在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3~4 次;最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液,沸水煮 5 分钟; SDS-PAGE,Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
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