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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
10
- 英文名:
Cooperia curticei
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50次
产品名称:短古柏线虫染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称:Cooperia curticei
产品规格:50T
保存及有效期:请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:样品模板
产品特点:
1. 一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据产品相关的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
短古柏线虫染料法荧光定量PCR试剂盒包装规格及成分(具体信息详见说明/书):
| 编号 |
成分 |
规格 |
| 试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(红盖) |
| 试剂二 |
超纯水 | 1 mL(亮黄色) |
| 试剂三 |
引物混合液 | 100 μL(白盖) |
| 试剂四 |
阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL(黄盖) |
| 说明/书 |
使用手册 | 1 份 |
短古柏线虫染料法荧光定量PCR试剂盒注意事项:
1.所有操作严格按照说明/书进行;
2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
3.反应液应避光保存;
4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
跨内含子设计引物的方法来避免基因组DNA及假基因(Pseudogenes)的影响。如分别在相邻的两个外显子上设计qPCR引物,这样基因组DNA的扩增片段与cDNA扩增片段相比就增加了一个较大的内含子,而荧光定量PCR的延伸时间很短,很难扩增出大片段,如果使用SYBR Green方式检测,一旦有来源于基因组的扩增片段出现也可以在分析溶解曲线时发现。而对于原核生物,必须经过DNase I消化去除基因组DNA;但是,很多实验者发现,跨内含子设计引物有时的实验结果不佳,原因可能是基因组DNA增加了模板的复杂
标记(生物素、荧光、地高辛和Eu3+等)、引入与蛋白质结合的DNA序列、引入突变位点、插入与缺失突变序列和引入启动子序列等。 2 特定PCR的引物设计 在尽量遵循引物设计基本原则的同时,根据不同的实验目的,需要注意一些相应的事项,总结如下: 01 荧光定量PCR 荧光定量PCR有染料法和探针法两种。染料法只需要设计引物,而探针法除设计引物之外还得设计一条探针。 引物设计要尽量满足以下要求: 确保模板是cDNA
。 2、若 NTC 出现的扩增曲线是由引物二聚体造成的,其长度往往较短(一般引物二聚体的长度大约为 50 - 60bp), 低于目的片段的长度(目的片段长度一般为 80 - 200bp),所以引物二聚体的 Tm 值小于目的片段的 Tm 值,引物二聚体形成的融解曲线的峰形与目的基因的峰形不重叠。 3. CT 值很大怎么办? 造成 CT 值偏大的因素较多,主要分为以下两大类情况: (1)相同体系,前期实验 CT 值正常,本次实验,所有基因扩增 CT 值皆偏大。 这种情况下,需要排查 RNA 是否存在降解










