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文献和实验2 Day3 Day4-Day6 Day7-Day8 Day9-Day14 Day15-Day22 Day23-Day30 近岸蛋白产品货号 基础培养基 DPBS Essential 8 RPMI RPMI RPMI RPMI DMEM DMEM DMEM DMEM FBS - - - 0.2% 2% - - - - - Vitronectin 5μg
内的,而酶只有在甘油浓度 具体操作如下:在 1.5 mL 离心管中依次加入DNA(1 μg/μl)20 μg10× 酶切 buffer 4.0 μl限制性内切酶(10 U/μl)5.0 μl加 ddH2O 至 500 μl在最适温度下消化 1-3 hr。消化结束时可取 5 μl 电泳检测消化效果。如果消化效果不好,可以延长消化时间,但超过 6 hr 已没有必要。或者放大反应体积,或者补充酶再消化。如仍不能奏效,可能的原因是 DNA 样品中有太多的杂质,或酶的活力下降。消化后的 DNA 加入 1/10
提取,NSB 含有 1% ( V/V ) Nonidet NP-40 (Roche) 和 0.5% ( V/V ) 脱氧胆酸钠(Sigma) 。 ( 2 ) 可溶性馏分(S2 ) (图 8-1,S2 ):第二份馏分用低离子强度缓冲液提取,这种缓冲液含有 10 mmol/L Tris-HCl ( pH 8.0 ) 和 1 mmol/L EDTA。 ( 3 ) 染色质馏分(图 8-1, Chr):为了提取第三份馏分,使用的缓冲液由 NSB 组成 ,其中含有 100 μg/ml 无
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