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文献和实验大于 109 计数/分/μl。六、杂交Southern 杂交一般采取的是液-固杂交方式,即探针为液相,被杂交 DNA 为固相。杂交发生于一定条件的溶液(杂交液)中并需要一定的温度,可以用杂交瓶或杂交袋并使液体不断的在膜上流动。杂交液可以自制或从公司购买,不同的杂交液配方相差较大,杂交温度也不同。下面给出的为一杂交液配方:PEG 6000 10%;SDS 0.5%;6×SSC;50% 甲酰胺。 该杂交液的杂交温度为 42 ℃。1.预杂交NC 膜浸入 2× SSC 中 5 min,在杂交瓶中加入杂交
光波长520nm处测定荧光强度,与绘制的标准曲线比较定量。本方法检出限为3ng。 3 试剂 3.1 环己烷。 3.2 硝酸。 3.3 过氯酸。 3.4 盐酸。 3.5 氢溴酸。 3.6 1 9盐酸溶液:取10mL盐酸,加90mL水。 3.7 1 1氨水。 3.8 5 95去硒硫酸:取5mL去硒硫酸,加于95mL水中。 去硒硫酸:取200mL硫酸,加于200mL水中,再加30mL氢溴酸,混匀,置沙浴上加热蒸去硒与水至出现
室一般用6.5%的非变性胶.制胶很重要,直接影响电泳的效果!一般控制在5分钟凝固的效果. 10X TBE 1.0ml 40% Acrylamide(40%聚丙烯酰胺) 3.3ml 50% Glycerol(50%甘油) 1.0ml dH2O(蒸馏水) 14.8ml TEMED(四甲基乙二氨) 20μl 脱气10min 10% AP(过硫酸氨) 120μl 总量 20.0ml 2. 一般试剂盒包括的试剂 10X Binding
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