THP-1 Reporter Cell Line

THP-1 Reporter Cell Line 细胞说明书

产品信息
细胞名称：        THP-1 Reporter Cell Line细胞
细胞来源:           人THP-1细胞株
细胞类别：        稳定表达报告基因的稳定细胞系
报告基因：        NFκB-SEAP和IRF-Luc
生长特性：        悬浮生长
细胞规格:           1 X 10⁶cells/T25 或冻存管
培养方法:           1640 + 2 mM Glutamine + 25 mM HEPES + 10% HI FBS + 1% Pen/Strep
选择抗性:           5 ug/mL blasticidin + 50 ug/mL Zeocin
培养条件：        37℃, 5% CO2
冻存条件:           90% FBS + 10% DMSO
传代方法：        一般每3天以密度5x10⁵ cells/mL传代一次，不要让细胞密度超过2x10⁶ cells/mL

细胞培养操作
干冰运输：收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏
常温运输：收到细胞后，请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代
细胞传代：细胞密度达1-2x10⁶ cells/mL，即可进行传代培养

培养瓶中细胞操作步骤

1. 收到细胞后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因为运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞状态变化的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。
2. 对于悬浮细胞，在生物安全柜中将培养瓶中的细胞转移至离心管，150 g 离心 5 分钟，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于合适的CO₂含量的37℃恒温培养箱中培养。

冻存管细胞操作步骤
注意： 为保证细胞的高活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1. 将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约1分钟。
2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3. 将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。
4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。
5. 将细胞置于含有5% CO₂的37℃恒温培养箱中培养。

悬浮细胞传代可参考以下方法：
 一、直接传代法
    1、待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；
    2、用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3；
    3、加入适量的新鲜培养基，继续培养。
 二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）
    1、将细胞悬液转移到离心管内；
    2、150 g 离心 5 min，弃去上层清液；
    3、使用新鲜的培养基重悬细胞；
    4、吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

细胞冻存操作

1. 150 g离心5分钟去掉上清。加1 mL预冷冻存液（90% 血清 + 10% DMSO）重悬细胞，轻轻混匀，细胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支冻存管冻存1 mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
2. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱，放置过夜之后以后转入液氮灌储存。