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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
20
- 英文名:
Leucocytozoon spp.
- 保质期:
保存期限为12个月
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50T
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 住白细胞原虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | 50T | LZ-P3731 |
【检验原理】
本试剂盒即开即用,用户只需要提供样品DNA模板,引物和探针经过优化,灵敏性高,提供阳性对照,便于区分假阴性样品,特异性高,引物是根据指标DNA高度保守区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应,既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级,本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
【试剂组成】
【使用方法】
试剂准备(试剂准备区)
稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样本处理(样本处理区)
2.1如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
2.2 核酸提取:核酸提取可以采用上海抚生实业有限公司的核酸提取或纯化试剂,操作方法按照说明书进行。
3.Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
3.1如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。
| Rhesus antibody Rh RAD9 细胞周期检查控制蛋白质抗体 规格 0.1ml | Anti-TWIST protein TWIST蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml |
| Rhesus antibody Rh Laminin alpha 4 层粘蛋白α4抗体(Lamininα4) 规格 0.2ml | Anti-C-Met/HGFR/HRP 辣根过氧化物酶标记肝细胞生长因子受体(原癌基因蛋白)抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml |
| sCD38(Human Soluble Cluster of differentiation 38) ELISA Kit 人可溶性CD38 96T | SLITRK4: 神经突触相关蛋白SLITRK4抗体 0.2ml |
| 大耳山羊肺细胞;LDG-1 | Rhesus antibody Rh IgG F(ab')2/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗人IgG F(ab')2 规格 0.1ml |
| EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0904 | Rhesus antibody Rh IL-23R 白介素-23受体抗体 规格 0.2ml |
| ICAM2 Others Mouse 小鼠 ICAM-2 / CD102 人细胞裂解液 (阳性对照) | Rat IgM/Cy3 荧光素Cy3标记大鼠IgM 0.1ml |
| Rabbit Anti-chi IgM/FITC 荧光素标记兔抗鸡IgMMulti-class antibodies规格: 0.3ml | DACH2: 转录调节因子DACH2抗体 0.2ml |
| Human immunosuppressive acidic protein,IAP ELISA Kit 人免疫抑制酸性蛋白Multi-class antibodies规格: 48T | 人脑血管平滑肌细胞总RNAHBVSMC tDNA |
| Insig1: 胰岛素诱导基因1抗体 0.2ml | CD300LG Others Human 人 CLM-9 / EM4 / CD300LG 人细胞裂解液 (阳性对照) |
| Anti-Dnmt3 Beta DNA甲基转移酶-3β抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml | 615小鼠状肺腺癌瘤株;P615 小鼠肾动脉内皮细胞完全培养基 100mL |
| Rhesus antibody Rh AVPR2 精氨酸加压素受体2抗体 规格 0.1ml | 人脉络膜血管细胞完全培养基 100mL |
| C-Peptide ELISA Kit 大鼠C肽 96T | 人骨骼肌星形细胞(HSkMSC)(5×105) CSC, 小鼠心肌细胞 Mouse |
| ANKRD26: 锚蛋白重复结构域蛋白26抗体 0.2ml | 住白细胞原虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒人胚肾细胞-F克隆;293F |
| Rhesus antibody Rh Phospho-Cofilin/CFL1 (Tyr139) 0酸化丝切蛋白抗体 规格 0.1ml | 小鼠胚胎成纤维细胞 英文名称: PA317 |
| DIS3L: 有丝分裂控制样蛋白DIS3L抗体 0.2ml | NAMALWA细胞,人Butt`s淋巴瘤细胞 小鼠肾癌细胞株,RuCa细胞 人间充质干细胞-肝脏裂解物HMSC-hp L |
【注意事项】
1.PCR 操作各阶段应严格分区操作,避免交叉污染。
2.试剂盒各组分使用前应充分融化混匀,离心数秒后使用。
3.各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。
4.待测标本若不及时检测,应保存于-20℃或-70℃。
5.样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。
6.PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。
7.本试剂盒仅用于科研使用,不做为临床诊断使用。
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文献和实验所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率,把引物二聚体调整到越小越好;探针法则需要设计荧光探针,这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个:完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上;这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置,根据自己试验情况而定,本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
裂解红细胞再去折腾了,必须使用可以直接裂解全血的裂解液,乘RNA酶还没有完全降解RNA的时候,就抑制住RNA酶,然后往下面提取。B: 新鲜的血液(3) 可以选择RN25 RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒,这个原理就是先红细胞裂解液裂解红细胞得到白细胞,然后Trizol(TRIpure)裂解白细胞,最后离心柱子漂洗。(4) 也可以用RN23 RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒。(5) RN06 EASYspin 全血RNA
。 1 HCMV感染的特点 HCMV为疱疹毒科β属的双螺旋DNA病毒,仅能感染人类,是人类疱疹病毒中最大的一组病毒,直径约200 nm,基因组大小为229 kbp。电镜下HCMV由内向外,由核心、衣壳、被膜以及包膜组成。HCMV的自我复制周期分为三个阶段〔1〕:即刻早期(immediate early,IE)、早期(early,E)以及晚期(late,L)。整个复制周期约48~72小时。 HCMV感染在人群中广泛存在,用血清学方法调查HCMV感染率,发达国家为40%~
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