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文献和实验CRISPR/Cas 是进行基因编辑的强大工具,可以对基因进行定点的精确编辑。在向导 RNA(guide RNA, gRNA)和 Cas9 蛋白的参与下,待编辑的细胞基因组 DNA 将被看作病毒或外源 DNA,被精确剪切。一、寻找目的基因的靶标使用在线设计网站 CRISPR direct,如需直接复制网址,可在生物学霸后台对话框回复 direct即可。靶点挑选要点:基因敲除靶点应设计在起始密码子附近(包括起始密码子)或者起始密码子下游的外显子范围内。不同 Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率
Immunity:北大蒋争凡课题组发现 STING 后高尔基体囊泡转运的重要性及机制
高尔基体(trans-Golgi network, TGN)上的含量最高。细胞中的 PI4P 的含量主要受其合成酶 PI4Ks (PI4KA, PI4KB, PI4K2A 和 PI4K2B) 和降解酶 SAC1 的调控。PI4P 不仅是合成 PIP2 和 PIP3 的前体,也是重要的信号分子,在膜泡运输、脂质转运和细胞器形态维持等方面发挥关键作用。 2021 年蒋争凡实验室利用 STING 自激活突变体诱导细胞死亡的特性,在 HT080 细胞中进行了基于 CRISPR-Cas9 介导的全基因组筛选
就会降解一半,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF,样品处理超过1 h,补加一次。 苯甲基磺酰氟[(PMSF),C7H7FO2S或C6H5CH2SO2F] 是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下,要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤,已污染的工作服丢弃掉。 9. 氯仿(CHCl3) 麻醉剂;脂肪、橡胶、树脂、油类、蜡、磷、碘和粘合压克力的溶剂
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