1BioEasy SYBR Green I 荧光PCR试剂盒

四步法消除SYBR Green Ⅰ实时定量RT

曲线分析. 依据PDs 和扩增产物的熔解温度( Tm) 特点,在通用的三步法的延伸步骤之后,增加一个短暂的(5 s) 恒温和荧光检测步骤,使这个步骤的温度高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm ,简称该法为四步法. PDs 的Tm 通常高于72 ℃,但低于扩增产物的Tm . 将四步法第四步的温度设置在高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时,四步法能够有效地消除PDs 的影响. 对三步法和四步法SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR 进行了比较,发现三步法根本不能用于RNA 的实时定量,而四

实时荧光 PCR 技术：比你想象的更丰富！

(donor) 和能量受体 (acceptor) 对, 其中供体的发射光谱与受体的吸收光谱重叠，当它们在空间上相互接近到一定距离 (1～10 nm) 时，激发供体而产生的荧光能量正好被附近的受体吸收，使得供体发射的荧光强度衰减，受体荧光分子的荧光强度增强。 图一. 荧光共振能量转移原理图 实时荧光 PCR 技术种类 染料法 SYBR Green I 是一种比较常见的荧光染料，可以非特异的结合双链 DNA 小沟，它可以嵌合进 DNA 双链，但不结合单链。当 SYBR Green I 在溶液

PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究

）上检测荧光。将芯片置于显微镜的载物台上，在普通光源照明下，调节载物台的垂直位置，使待探测的芯片上表面位于20X物镜的焦平面上。再调节载物台的水平位置，使反应池位于目镜视野的中心。激发光源为氩离子激光器的488nm线，检测方式是背反式。 1.4　PCR基因芯片上应用SYBR Green荧光染料 1.4.1　普通PCR反应检测20例正常人HLA-A2与非A2，应用4步位点特异性PCR反应初筛正常人HLAA2与非A2，4步反应引物如下（表1）；PCR反应条件按照本室常规。 1.4.2　用SYBR