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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
47
- 英文名:
Edwardsiella tarda
- 保质期:
保存期限为12个月
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50T
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 迟钝爱德华菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 50T | LZ-P3484 |
【检验原理】
本试剂盒即开即用,用户只需要提供样品DNA模板,引物和探针经过优化,灵敏性高,提供阳性对照,便于区分假阴性样品,特异性高,引物是根据指标DNA高度保守区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应,既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级,本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
【试剂组成】
【使用方法】
试剂准备(试剂准备区)
稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样本处理(样本处理区)
2.1如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
2.2 核酸提取:核酸提取可以采用上海抚生实业有限公司的核酸提取或纯化试剂,操作方法按照说明书进行。
3.Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
3.1如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。
| Rhesus antibody Rh IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的兔抗大鼠IgG 规格 0.1ml | Anti-VAT 囊泡乙酰胆碱通道抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml |
| Rhesus antibody Rh KLRF1/NKp80 细胞毒性受体NK-p80抗体 规格 0.2ml | Anti-CREB-1/FITC 荧光素标记环腺苷酸应答元件结合蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml |
| IRF(Human interferon Regulatory Factor) ELISA Kit 人干扰素调节因子 96T | RCC1: 染色体浓缩调控蛋白1抗体 0.2ml |
| 大鼠脑胶质瘤细胞;C6 | Rhesus antibody Rh IgG/APC APC标记的兔抗马IgG 规格 0.1ml |
| 小肠血管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml) | Rhesus antibody Rh IL-13Ra1 白细胞介素-13受体a1抗体 规格 0.1ml |
| CC Others Human 人 CC / chymoypsin C 人细胞裂解液 (阳性对照) | Guinea IgG/APC 荧光素APC标记豚鼠IgG 0.1ml |
| IgA/Gold 金标记兔抗人IgA(10nm/15nm)Multi-class antibodies规格: 0.5ml | Complement C3 beta chain: 补体C3b抗体 0.1ml |
| TPO(Rat Thrombopoietin,TPO )ELISA kit 大鼠血小板生成素Multi-class antibodies规格: 48T | 人虹膜色素上皮细胞总RNAHIPEpiC NA |
| IKK gamma: KB抑制蛋白激酶γ抗体 0.2ml | CSAG1 Others Human 人 CSAGE / CSAG1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
| Anti-EDNRA 内皮素受体A抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml | EL4细胞,小鼠淋巴瘤细胞 3T3-Swiss albino(胚胎成纤维细胞) 人肺转化细胞;AE1201 |
| Rhesus antibody Rh ATG16L2 自噬体ATG16L2蛋白抗体 规格 0.2ml | ACTE1 非洲爪蟾胚胎细胞 |
| Big ET ELISA Kit 大鼠大内皮素 96T | SIRPA Others Human 人 SIRPA / CD172A 人细胞裂解液 (阳性对照) |
| alpha 2 Macroglobulin: α2巨球蛋白(α-2M)抗体 0.2ml | 迟钝爱德华菌探针法荧光定量PCR试剂盒小鼠癌细胞;CCC-Ca761-03 |
| Rhesus antibody Rh Phospho-CEBP beta (Ser105) 0酸化转录调节因子CEBP β抗体 规格 0.1ml | TE-10(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 |
| Endostatin: 内皮抑素/内皮他丁抗体 0.1ml | EC109,人食管癌细胞 卵巢癌顺铂耐药株,SKOV-3/DDP细胞 SW1353(骨肉瘤细胞) |
【注意事项】
1.PCR 操作各阶段应严格分区操作,避免交叉污染。
2.试剂盒各组分使用前应充分融化混匀,离心数秒后使用。
3.各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。
4.待测标本若不及时检测,应保存于-20℃或-70℃。
5.样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。
6.PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。
7.本试剂盒仅用于科研使用,不做为临床诊断使用。
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文献和实验一、细菌的传播与致病 迟钝爱德华氏杆菌是淡水鱼及其他冷血动物肠道正常菌群的一部分,存在于这些动物的肠内容物、粪便及污染水源中,也能从捕食鱼类而生活的鸟类和哺乳动物的粪便中分离到。 本菌对人类而言为条件致病菌,渔民、农民及伐木工等为易感人群。 人类感染主要经消化道摄入。临床表现有胃肠炎、败血症(酷似伤寒)、脑膜炎、局灶性感染(肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿及胆管炎等)及创伤性感染(游泳或钓鱼时皮肤破损致蜂窝织炎或伤口感染)。 二、细菌的生物学特性 迟钝爱德华菌
相关专题 实验室很多同学都要做Real time PCR实验,实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见,不过也有实验室前没有做过的,查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。 荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物,探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高。目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针(荧光共振能量传递探针)和分子
进行扩增杂交,操作按试剂盒说明书进行;采用空肠弯曲菌、解尿支原体作为对照菌进行荧光定量PCR。 【注意事项】 1. 配制和使用硝酸银溶液时要格外小心,不要滴洒在地上,桌上及手上等处,氧化为黑色的液点极难去除。 2. 荧光定量PCR操作时要戴口罩及一次性手套,并尽可能在低温下操作。 思 考 题 简述荧光定量PCR的基本原理。 (曲 萍)
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