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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
1000
- 英文名:
Exosomes Green Fluorescent Labeling Kit
- CAS号:
PKH67
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海研匠生物科技公司
- 保存条件:
2-8℃避光保存
- 规格:
20ul
外泌体绿色(PKH67)荧光标记试剂盒
| 产品名称 | 货号 | 规格 | ||
| 外泌体绿色(PKH67)荧光标记试剂盒 | YJ04004 | 20 μL | ||
运输和保存方法:2-8℃避光保存,有效期12 个月.
一、产品简介:
外泌体绿色荧光标记试剂荧光染料能将脂质尾巴的绿色荧光染料(PKH67)结合到细胞膜脂质区域上。该试剂盒可以在染色过程中增加染色效率,同时维持细胞活力。可用于外泌体的标记染色实验,监测细胞吞噬作用。
观察荧光:激发波长(Ex)-490nm;发射波长(Em)-502nm.
二、产品组分:
| 产品名称 | 数量 | 规格 | ||
| PKH67母液 | 1 | 20 μL(1mM) | ||
| Dilution Buffer | 1 | 200ul | ||
注意事项
1. PKH67 母液易水解,建议分装保存,分装后用封口膜密封保存;
2. PKH67 工作液应现配现用,不能能提前配制,否则将影响染色效果;
3. PKH67 溶解液在较低温度下会凝固而粘在管底内,可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途!
三、使用方法:
1.外泌体蛋白定量:取适量外泌体进行BCA 蛋白浓度测定以确定外泌体蛋白量;
2.染料工作液制备:用Dilution buffer 将PKH6 储存液稀释10 倍,配制浓度为100 μM 的染料工作液(避光操作,工作液应根据实验用量适当配置,现配现用);
3.外泌体染色:
(1)在外泌体中加入染料工作液,建议加入剂量如下:
| 外泌体蛋白量 | 加入染料工作液(ul) |
| 10-200ug | 50ul |
| 200~500 ug | 100ul |
(2)加入染料工作液后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再静置孵育10min;
(3)向孵育后的外泌体-染料复合物中加入10 mL 的1x PBS 混匀;
(4)按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除多余染料;
(5)取200 μL 1×PBS 重悬沉淀物,沉淀即为染色后的外泌体。
注意:过度染色会导致外泌体膜完整性丧失,最佳PKH67 染料/外泌体用量需根据自身实验而决定。
更多实验可点击下方链接:
外泌体提取实验:https://www.biomart.cn/infosupply/110578269.htm
外泌体鉴定实验:https://www.biomart.cn/infosupply/110564279.htm
外泌体检测NTA实验:https://www.biomart.cn/infosupply/95676015.htm
外泌体检测电镜实验:https://www.biomart.cn/infosupply/95676019.htm
外泌体蛋白质组学实验:https://www.biomart.cn/infosupply/110568960.htm
外泌体转录组,microRNA和lncRNA组学实验:https://www.biomart.cn/infosupply/110568892.htm
外泌体WB鉴定 https://www.biomart.cn/infosupply/95676009.htm
外泌体红色荧光(PKH26)标记试剂盒:https://www.biomart.cn/infosupply/110585349.htm
无外泌体胎牛血清:https://www.biomart.cn/infosupply/110567221.htm
无外泌体完全培养基:https://www.biomart.cn/infosupply/110585351.htm
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文献和实验1.. Fischer K, et al. The flow cytometric PKH-26 assay for the determination of T-cell mediated cytotoxic activity. Methods. 2003;31(2):135-142. [Content Brief]
2.Dooley, K; McConnell, RE; Xu, K; et al.A versatile platform for generating engineered extracellular vesicles with defined therapeutic properties.[J].Mol Ther.2021,29(5):1729-1743
3.Arab, T; Mallick, ER; Huang, Y; et al.Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single-particle analysis platforms.[J].J Extracell Vesicles.2021,10(6):e12079
4.Rui Chen, Xiaobo Zhou, Yong Wu, Qingyun Liu, Qian Liu, Jinhua Huang, Fuyou Li, NIR-II emissive lateral flow immunoassay for accurate determination of tumor marker in hemolysis,Sensors and Actuators B: Chemical,Volume 328,2021,129050
主要分为两大类,第一类是 PKH67(绿色荧光)/PKH26(红色荧光),由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合,所以染色效果较好,应用较广泛。 图1 PKH67 标记的外泌体与神经元之间相互作用 Acta Neuropathol Commun. 2018 Feb 15;6(1):10. 图2 PKH26 标记的外泌体与 MDA‐MB‐231 细胞共培养 Cancer Sci. 2019 Oct;110(10):3173-3182. 第二类是 Di 系列的亲脂性染料,包括DiI(橙色荧光
PKH染料,如PKH67和PKH26,是高荧光、亲脂性的长链羰花青染料,目前被应用于细胞外囊泡(EVs)及其功能的研究,有研究评估了PKH在研究EV摄取时的适用性,发现PKH标记会显著影响外泌体细胞摄取结果的真实性,引入假阳性结果[1]。 不同纯化方法去除PKH 已有共识的是,PKH标记EV会引入PKH颗粒杂质,Lai等人[2]首先发现非EV的PKH阳性结构的存在,他们表明用仅PKH67对照组比PKH67染色的EV样品具有更大的荧光信号。在上篇文章中,我们论证
细胞膜染料+外泌体染料双染策略,彻底解决外泌体摄取实验中的假阳性问题
actin 摄取实验对比,图 Fig.4a 中可以看到 CellLINK 555 标记的清晰的红色膜轮廓,经过 EvLINK 505 标记后的绿色外泌体分散在细胞膜内;Yu 等使用 F-actin 标记细胞膜轮廓,PKH-67 标记外泌体,尽管共聚焦显微镜下观测到的外泌体明亮的绿色荧光,然而该绿色荧光呈弥散状分布,难以较好区分外泌体与细胞膜。 Fig.4 (a)EvLINK 505 标记的外泌体+CellLINK 标记细胞膜和(b)PKH-67 标记的外泌体+F-actin 标记细胞膜摄取
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