核酸提取或纯化试剂（商品名： MagaBio plus 病毒

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

试剂（可使用我公司转染试剂 Polyfect-V 或您的实验室中现有转染试剂）。 5、病毒包装细胞：我公司的 293V、HEK293 或者 HEK293T 均可使用。需要注意的是包装细胞状态对于病毒产量很重要。细胞聚团、贴壁不牢、生长缓慢等均是细胞老化的表现，这样的 293 细胞是不能使用的。 6、慢病毒纯化试剂盒（可用我们的 PEG 纯化产品，货号 P1201；或者其他公司的商品化试剂盒；推荐用超速离心纯化）。 7、Polybrene 慢病毒感染辅助试剂（6 mg/ml

手把手教你做好体外 DNA 重组

，例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等，常用的载体一般为质粒；根据需要可直接从公司购买合适的载体，也可以自己构建。（3）连接：目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体，使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同，产生三种连接方式：粘端连接、平端连接和不相配的连接。（4）转化：将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞，使其在宿主细胞内复制扩增或表达，赋予宿主细胞新的生物特征。（5）克隆化：重组 DNA 分子转化大肠杆菌后，在平板

病毒RNA传统提取方法

。3、某些情况下（例如从感染了DNA病毒或用DNA转染的细胞中制备RNA时），必须从细胞总RNA中去除寡脱氧核核苷酸。否则，当用这种RNA构建cDNA库或进行引物延伸反应时应会出问题，反转录过程中法染的模板DNA片段可能会与RNA杂交而充当引物，从而导致物定mRNA5'末端定位的错误或产生截短的cDNA克隆。a）步骤12后，加200μl 3mol/L乙酸钠（pH5.2），用自动微量移液器反复吹吸，以重悬核酸沉淀，将悬浮液移至另一个灭菌的微量离心管内。b）用微量离心机于室温以12,000g离心10分钟，RNA