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文献和实验相关专题 成功走出第一步:DNA提取 碱裂解法 大量提取质粒(500mL菌液) 1、取培养至对数生长后期(一般培养12~16小时)的含待提质粒的细菌 培养液于离心杯中,配平,4℃下4000rpm离心15min,弃上清,然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽。 2、向盛有细菌 沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶液Ⅰ,重悬沉淀(先加5mL溶液Ⅰ,用干净的玻璃棒搅拌均匀后,再加剩下的部分)。
对数生长期的HL一60细胞,先按实验十三测定细胞活力,然后调整细胞浓度,制成300~1000活细胞/ml的细胞悬液。 2.取二个培养瓶每个瓶中加9ml调整好浓度的细胞悬液,然后各加入1ml 3%琼脂(已融化,在65℃水浴中放置),迅速加入,混匀。 3.用微量加样器吸140μl二甲基亚砜(MDSO),加到一个瓶中,充分混匀,为实验组,另一瓶不加DMSO,为空白对照组。 4.取一个16mm多孔培养板,每孔加1ml(35mm培养皿需加2ml)细胞琼脂悬液,勿有气泡,将实验组和对照组分两组加好
加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况3.5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。4.每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。5.终止培养,小心吸去孔内培养液。6.每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联
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