本试剂盒仅供科研使用
肉桂醇脱氢酶（ Cinnamyl-alcohol dehydrogenase，CAD)试剂盒说明书
（WS2001F 分光法 48 样）
一、 产品简介：
肉桂醇脱氢酶(CAD，EC 1.1.1.195）是作为植物次生代谢特别是木质素合成的关键酶,
与植物生长发育和抵御病原菌入侵关系密切。本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定
方法：CAD 催化肉桂醇和 NADP+生成肉桂醛和 NADPH，进而与特异的显色剂反应产生有
色物质，通过检测有有色物质的增加速率，进而计算出 CAD 酶活性的大小。
二、试剂盒组分与配制：
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰
和蒸馏水。
四、肉桂醇脱氢酶（CAD）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
①组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分充足的果实样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。
12000rpm 4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
②液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、 上机检测
①可见分光光度计预热 30min 以上，温度设定 37℃，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
②试剂放在 37℃水浴 5min；
③按照下表在 1mL 玻璃比色皿中依次加入试剂：
【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可延长反应时间 T（如：40min 或更长），
或加大样本量 V1（如增至 160μL，则试剂三相应减少），重新
调整后的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体×1 支
4℃保存
试剂三
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用前加入 28mL 提取液充分溶解，制备
成反应 mix；用不完的试剂 4℃保存;
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
试剂名称（μL）
测定管
样本
80
试剂一
160
试剂二
40
试剂三
520
混匀，立即 450nm 下读取 A1 值，避光孵育 30min
后读取 A2 值。ΔA=A2-A1。本试剂盒仅供科研使用
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 2.4343x + 0.0074，x 是 NADPH 摩尔浓度：μmol/mL，y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：在 37℃，每毫克组织蛋白每分钟使 1 nmol 肉桂醇氧化成 1 nmol 肉桂醛并且
使 1 nmol NADP+转换成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/mg prot）＝[(ΔA-0.0074)÷2.4343×V1×103]÷(V1×Cpr) ÷T
=13.7×(ΔA-0.0074)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位的定义：在 37℃，每毫克组织蛋白每分钟使 1 nmol 肉桂醇氧化成 1 nmol 肉桂醛并且
使 1 nmol NADP+转换成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/g 鲜重）＝[(ΔA-0.0074)÷2.4343×V1×103]÷(W ×V1÷V) ÷T
=13.7×(ΔA-0.0074)÷W
4、液体样本中 CAD 活力计算:
单位的定义：在 37℃，每毫克组织蛋白每分钟使 1 nmol 肉桂醇氧化成 1 nmol 肉桂醛并且
使 1 nmol NADP+转换成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min /mL）＝[(ΔA-0.0074)÷2.4343×V1×103]÷V1÷T=13.7×(ΔA-0.0074)
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.08 mL；
T---反应时间，30 min；
W---样本质量，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（0.5μmol /ml）：向标准品 EP 管里面加入 1.2ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1,0.2,0.3,0.4, 0.5.μmol/ml。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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文献和实验
