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肉桂酸4-羟基化酶(C4H)试剂盒,微板法

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  • ￥600 - 1660
  • wksubio
  • WS1001W
  • 国内
  • 2025年07月23日
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    • 英文名：

      Cinnamate 4-Hydroxylase (C4H) Kit

    • CAS号：

      WS1001W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T/96T

    规格：48T产品价格：￥600.0
    规格：96T产品价格：￥1660.0
    本试剂盒仅供科研使用
    肉桂酸 4-羟基化酶（C4H）试剂盒说明书
    （货号：WS1001W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    肉桂酸-4-羟基化酶（C4H，EC 1.14.13.11）是苯丙烷类代谢途径的关键酶。可有效调节
    与之相应的黄酮类化合物等次生代谢产物的合成，其活性可作为植物抗性的一个生理指标。
    本产品测试原理是以肉桂酸作为底物，在酶促反应的最适条件下，肉桂酸-4-羟基化酶催
    化底物生成 4-羟基反式肉桂酸，其在最佳 PH 值下，产物 4-羟基反式肉桂酸在 340nm 下有
    最大吸收峰，进而计算出该酶活性大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    试剂规格
    保存方式
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 5mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂×2 瓶
    -20℃保存
    用前甩几下使粉剂落入底部，
    每瓶再加 20mL 蒸馏水溶解，用
    不完的试剂分装后-20℃保存，
    禁止反复冻融，一周内用完。
    试剂三
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂四
    液体 5mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    液体 6mL×1 瓶
    4℃保存
    三、所需用的仪器与用品：
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、肉桂酸 4-羟基化酶（C4H）活性检测：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液组织，进行冰浴匀
    浆。12000rpm, 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂（μL）
    测定管
    空白管（仅做一次）
    样本
    100
    试剂一
    50
    50
    试剂二
    350
    350
    试剂三
    300
    400
    混匀，30℃水浴反应 30min
    试剂四
    50
    50
    混匀，静置 2min
    试剂五
    60
    60
    混匀后，取 200μL 转移至 96 孔板，在 340nm 下读取
    吸光值 A，△A=A 测定-A 空白。本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】若△A 的值在零附近徘徊，可增加样本加样量（如增加至 200μL，则试剂三相应减少）
    或增加反应时间 T，则改变后的加样体积 V1 和 T 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1. 按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟产生 1nmol 的 4-羟基反式肉桂酸为一个酶活力单位。
    C4H（nmol/min/g 鲜重）=[(△A÷ε÷d×V2×109) ]÷(W×V1÷V)÷T
    =24.8×ΔA÷W
    3. 按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol 的 4-羟基反式肉桂酸为一个酶活力单位。
    C4H（nmol/min/mg prot）=[(△A÷ε÷d×V2×109) ]÷(V1×Cpr) ÷T
    =24.8×ΔA÷Cpr
    ε ---4-羟基反式肉桂酸在此反应条件下于 340nm 处的摩尔吸光系数，2.45×104 L/mol /cm；
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.1 mL；
    V2 ---反应体系总体积，910μL=9.1×10-4 L；
    d --96 孔板光径，0.5 cm；
    T---反应时间，30 min；
    W---样本质量，g；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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