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胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD）活性试剂盒,微板法

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  • ￥1540
  • wksubio
  • WS6190W
  • 国内
  • 2025年11月07日
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    • 英文名：

      Cytoplasmic Glycerol 3-Phosphate Dehydrogenase (ctGPD) Activity Kit

    • CAS号：

      WS6190W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD）活性测定试剂盒说明书
    （货号：WS6190W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD，EC 1.1.1.8）的酶活水平直接决定了葡萄糖分解代谢
    过程中向甘油合成方向的物质流分配量，也因此决定甘油的生成水平。
    ctGPD 为 NAD 依赖型，催化磷酸二羟*酮生成 3-磷酸甘油。通过 340nm 下测定 NADH
    的下降量，进而得出 ctGPD 的酶活性大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×3 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使粉剂落入底
    部，每支分别加
    0.44mL
    蒸馏水溶
    解备用。用不完的试剂
    -20℃
    保存，
    禁止反复冻融，三天内用完。
    试剂二
    液体 17mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使粉剂落入底
    部，加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
    四、胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶（ctGPD）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g）到研钵内，加入 1mL 提取液，在冰上进
    行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    [注]：也可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取）
    ② 细菌/真菌样本：
    先收集细菌/真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌/真菌加入 1mL 提取液；
    冰浴超声波破碎细菌/真菌（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
    12000rpm， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    [注]：也可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取）
    ③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清液检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
    ② 在 96 孔板中依次加入下列试剂：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    20
    试剂一
    10
    试剂二
    160
    试剂三
    10
    混匀后立即在 340nm 处读取 A1 值，5min 后读取 A2。本试剂盒仅供科研使用
    2
    ΔA=A1-A2。
    【注】：加完试剂三即启动反应，所以试剂三加完需立即检测，若 A1 超过 1.2 或ΔA 超过 0.35，则
    减少样本上样量，试剂二相应增加保持原体系不变（如样本上样量减为 10μL 时，试剂二
    增为 170μL），或减少反应时间 T（如减为 2min）。则改变后的 V1 和反应时间 T 需带入
    计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    ctGPD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W× V1÷V)÷T=643.1×ΔA÷W
    2、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    ctGPD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr)÷T =643.1×ΔA÷Cpr
    3、按细胞数量计算：
    酶活定义：每 104个细胞每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    ctGPD（nmol/min/104cell）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(500×V1÷V)÷T=1.29×ΔA
    4、按液体体积计算：
    酶活定义：每毫升液体每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    ctGPD（nmol/min/mL）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷V1÷T=643.1×ΔA
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.02mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    d---光径，0.5cm；
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
    W---样本质量，g；
    T---反应时间，5min；
    Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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