- ￥280 - 540
- 百生跃(Bioleaper)
- 上海
- BR1001505
- 2025年07月07日
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- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
1年
- 英文名：
Endonuclease BgIII
- 库存：
999
- 供应商：
百生跃(Bioleaper)
- 规格：
2000U/4000U
| 规格： | 2000U | 产品价格： | ￥280 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 4000U | 产品价格： | ￥540 |
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- 内容
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文献和实验RNA PolyIII 聚合酶转录终止位点，且两端分别设计酶切位点。5. pSUPER 载体进行 BglII，HindIII 的双酶切。获得线性质粒载体。6. DNA 双链和病毒载体的连接。7. 连接产物的转化。8. 测序验证 ShRNA 序列是否连接到载体。9. 将质粒转染细胞验证 ShRNA 敲减效率。以上是 shRNA 的茎环引物设计方法，在构建其它慢病毒或者腺病毒质粒时，方法是通用的。但是，对于以下几种情况：（1）不同的质粒，（2）选用不同的限制性内切酶，（3）连接质粒时选用重组或者黏性
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等） 在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。 无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5' 端。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI
分。Target preparation 总共用250ngDNA ，用20单位的限制性内切酶EcoRI、BglII 或者 XbaI ( New England Biolabs(NEB)) 在37度消化4小时。在75度热失活20分钟，消化后的DNA 同0.25 μM 的接头和DNA 连接酶在标准连接缓冲液（NEB）中16度共同孵育4小时。然后在95度孵育5分钟热激活酶。通过扩增连接了接头的DNA 来扩增靶目标，PCR缓冲液II(Perkin Elmer)包含2.5 mM MgCl2 、250μM dNTP
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