细胞冻存液（无血清，无DMSO）

培养细胞的保存和复苏

pH至7.7，过滤除菌分装，然后-20℃保存备用。EDTA液配方（0.2% 1000ml）EDTA（versene） 2 gNaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO4（12H2O） 2.9gKH2PO 40.2g以上药物同样充分溶解后，加新鲜的三蒸水至1000 ml，分装然后高压15磅30分钟灭菌，最后4℃保存备用。细胞冻存液：小牛血清90℅与二甲基亚砜（DMSO）10℅混合；-20℃冰箱保存备用。或小牛血清30℅，1640培养液60℅，DMSO10℅混合； - 20℃冰箱保存备用。

如何让细胞乖乖的死去活来

科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演。为了将每一种有生命的细胞较好的保存其原有的细胞特性或者长久的保存种质资源，实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃ 的液氮，使得细胞暂时脱离生长状态，等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏应用。在这一看似神奇的生命存储过程中，我们不禁要问，这是如何实现的呢？ 其实，细胞冻存和复苏的教科书和实验手册上面都有。小编不想再重复了。这里，我要谈谈应该注意的一些事项和技巧，大部分都是血泪教训

原代细胞冻存技术

原代细胞冻存技术：1、选用生长情况好，数量较多的原代细胞，冻存前一天换液一次。2、贴壁细胞需用0.25％胰酶常规消化将细胞消化下来，将细胞悬液收集至离心管中。3、1000rpm离心5分钟，弃上清液。4、沉淀加含DMSO的培养液，计数，调整至（1-10）×106 /ml。5、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。6、密封冻存管，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。7、用记号笔标明细胞种类，冻存日期。8、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃过夜）→液氮。