胰蛋白酶细胞消化液(含EDTA,不含酚红)

亲和层析法纯化胰蛋白酶粗液的方法步骤

之间的接触面，减少空间位阻，提高亲和层析的结合效率。合成过程要经过载体活化，接” 臀”、活化及连接配基等操作步骤。 目前常用的载体是琼脂糖胶粒。它具有机械强度高、透性好、载体本身非特异性吸附少等优点。除此以外，其他可用作载体的材料还有纤维素、葡聚糖凝胶(SePhadex)、多孔硅胶、树脂等。但是它们都具有不同程度的非特异性吸附，因此目前使用的并不多。 本实验采用猪胰蛋白酶的天然抑制剂—鸡卵类粘蛋白作为配基.从猪胰脏的粗提液中分离纯化胰蛋白酶。鸡卵类粘蛋白是一种专一性很强

做了 5 年 MTT 实验，跟你分享几点心得体会

。4. 比色：选择 490 nm 波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。个人心得体会1. 细胞消化、接种数量：注意消化和数量，消化和数量，消化和数量（重要的事情说三遍）。从我个人的实验经验来看，这是重中之重。若消化出现问题，则会影响细胞的活性，进而影响 OD 值。对于 MDA-MB-231、MCF-7、HS-578T 等一系列容易消化的细胞，消化时胰蛋白酶中不添加 EDTA，消化时也仅需胰酶浸润数秒即可。然而，对于 SW480 等一系列难以消化的细胞，胰蛋白酶中需添加浓度为 0.25

胰酶使用注意及贴壁细胞的消化

细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。4、此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。常用的细胞消化液为胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞