ELISA 洗涤缓冲液（20X）

ELISA 实验操作要点

水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用 pH 计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 3. 加样 在 ELISA 中一般有 3 次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在 ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。如测定需用稀释的血清（如间接

ELISA 提示

ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书，可以一定程度上避免出现意想不到的结果。参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质期，保证所有试剂按说明书上的建议正确保存； 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象，如沉淀或变色等； 3. 底物溶液应为无色； 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液（样品、标准品及其他试剂）时，及时更换枪头，避免交叉污染； 5. 确保孵育时间和温度与规定的高度一致； 6. 盒中试剂不能

别小瞧了ELISA

管显色适当时，即可终止酶反应。（三）洗涤洗涤在ELISA过程中不是反应聚，但却是决定实验成败的关键。洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯待塑料对蛋白质的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯（吐温，Tween）一类物质即右达到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，为非离子型的表面