- ￥810
- wksubio
- WS5190W
- 国内
- 2025年11月07日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Multifunctional Oxidase (MFO) Kit
- CAS号：
WS5190W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
96T
本试剂盒仅供科研使用
多功能氧化酶 (MFO)活性测定说明书
（货号：WS5190W 微板法 96 样）
一、产品简介：
多功能氧化酶 (MFO)是生物体内重要的一种解毒酶，可使昆虫适应植物的变化；减弱或
免受植物诱导抗性产生的有毒次生物质对昆虫的毒害。
多功能氧化酶（MFO）催化对硝基*甲*产生对硝基*酚，该产物在 405nm 下有特征吸
收峰，通过检测该物质在 405nm 处的光吸收增加速率，进而得出 MFO 活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、多功能氧化酶 (MFO)活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min，
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×2 支
4℃保存
每支用前甩几下使试剂落入底部，分
别加入 0.6mL 乙醇，完全溶解后备
用，现配现用。
试剂二
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
粉体 mg×2 支
-20℃保存
临用前甩几下或离心使试剂落到底
部，每支加 1.2mL
蒸馏水溶解
，用不
完的试剂分装后
-20
℃保存，禁止反
复冻融，三天内用完。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
试剂名称（
μL）
测定管
样本
50
试剂一
10本试剂盒仅供科研使用
2
【注】：若ΔA 小于 0.005，可增加样本量 V1（如增至 80μL，则试剂二相应减少），或增加取样质量
W（如增至 0.2g），则改变后的样本量 V1 和样本质量 W 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y =1.7082x-0.0005， PNP 摩尔浓度（
μmoL/mL），y 是△A。
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚（PNP）为 1 个酶活单位。
MFO(nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0005)÷1.7082×103×V1]÷(W×V1÷V)÷T
=19.5×(ΔA+0.0005)÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
MFO(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0005)÷1.7082×103×V1]÷(V1×Cpr)÷T
=19.5×(ΔA+0.0005)÷Cpr
4、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
MFO(nmoL/min/104cell)=[(ΔA+0.0005)÷1.7082×103×V1]÷(500×V1÷V)÷T
=0.039×(ΔA+0.0005)
5、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟产生 1nmoL 的对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
MFO(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0005)÷1.7082×103×V1]÷V1÷T=19.5×(ΔA+0.0005)
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.05mL；
T---反应时间，30 min；
W---样本质量，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的蛋白含量测定试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmoL/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 μmoL/ml。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
试剂二
60
试剂三
20
混匀，立即于 405nm 处读取吸光值 A1，
37℃孵育 30min 后读取 A2，ΔA=A2-A1。
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多功能氧化酶（MFO）试剂盒,微板法
￥810
