本试剂盒仅供科研使用
乙酰辅酶 A 羧化酶(Acetyl CoA carboxylase，ACC)试剂盒说明书
（货号：WS4190F 分光法 48 样）
一、产品简介：
乙酰辅酶A羧化酶（ACC，EC 6.4.1.2）广泛存在于生物界。在生物体内催化乙酰辅酶A
羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定
程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
ACC催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、无机磷和ADP，ADP与磷酸烯
醇式丙*酸在丙*酸激酶和乳酸脱氢酶的逐一作用下，使NADH氧化为NAD+，通过检测
NADH在340nm处的下降量来计算ACC的酶活力大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部，再
加
2.2mL
蒸馏水充分溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×4 支
-20℃保存
每支用前甩几下使试剂落入底部，再
加 0.55mL 的蒸馏水溶解备用。用不
完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复
冻融，三天内用完。
试剂三
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部，再加
1.2mL 蒸馏水充分溶解备用。
试剂四
液体 31mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部，再加
1.1mL 蒸馏水充分溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、
冰和蒸馏水。
四、乙酰辅酶 A 羧化酶（ACC）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细胞样本：
先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细胞加入 1mL 提取液；超声波破
碎细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；4ºC 约 12,000rpm
离心 10min，取上清作为待测样品。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104)：提取液(mL)为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊离心后取上清测定。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，设置温度 37℃,调节波长至 340nm，蒸馏水调零。本试剂盒仅供科研使用
2
② 试剂放在 37℃水浴 5min；
③ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
30
试剂一
40
试剂二
40
试剂三
20
试剂四
600
混匀，37℃下，孵育 10min
试剂五
20
混匀，37℃下，立即于 340nm 处读取吸光值 A1，
10min 后读取 A2，△A=A1-A2。
【注】：1.若ΔA 过小，可以延长反应时间（如：22min 或更长）再读取 A2，或增加样本加样量 V1（如
增至 60μL，则试剂四相应减小），重新调整的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
2.若 A2 值小于 0.45 或△A 大于 0.6，则需缩短反应时间 T（如减至 12min）再读取 A2 或减少样
本量 V1（如减至 10μL，则试剂四相应增加），重新调整的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重
新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACC(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=401.93×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACC(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=401.93×ΔA÷W
3、按细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACC(nmol/min/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.8×ΔA
4、按液体体积计算：
单位定义：每毫升液体样本每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACC(nmol/min/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=401.93×ΔA
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；
d---光径，1cm；
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.03mL；
V2---反应体系总体积，7.5×10-4 L；
T---反应时间，10 min；
W---样本质量，g；
500---细胞数量；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
文献和实验
