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游离胆固醇(FC)含量试剂盒,微板法

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  • ¥410
  • wksubio
  • WS1190W
  • 国内
  • 2025年07月23日
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    • 英文名

      Free Cholesterol (FC) Content Kit

    • CAS号

      WS1190W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    游离胆固醇(free cholesterol, FC)含量试剂盒说明书
    (货号:WS1190W 微板法 96 样)
    一、产品简介:
    游离胆固醇(FC)不仅参与形成细胞膜,而且是合成胆汁酸,维生素 D 以及甾体激素
    的原料。其血清浓度可作为脂代谢的指标。
    游离胆固醇(FC)在胆固醇氧化酶作用下被氧化生成 4-胆甾烯酮和 H2O2;接着与 4-
    氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物,其在 510nm处有特征吸收峰,通过检测 510nm
    处吸光值即可得出 FC 含量。
    二、试剂盒的组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部,再
    3.2mL 蒸馏水,充分震荡溶解
    试剂二
    液体 9mL×1
    4℃保存
    试剂三
    液体 6mL×1
    4℃保存
    标准品
    液体 1mL×1
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。
    四、游离胆固醇(FC)含量测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    ① 组织样本:
    称取约 0.1g 组织样本加入研钵中,加入 1mL 提取液,在冰上进行匀浆,12000rpm
    4℃或室温离心 10min,取上清液待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
    g):提取液(mL)15~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本:
    先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
    提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
    12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。
    ③ 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。
    2、上机检测
    ① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 510 nm
    ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。
    ③ 在 96 孔板中依次加入:
    试剂名称(μL) 测定管
    标准管
    (仅做一次)
    空白管
    (仅做一次)
    标准品
    40
    样本
    40
    试剂一
    30
    30
    30
    试剂二
    70
    70
    110本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂三
    60
    60
    60
    混匀,避光孵育 60min,于 510nm 处读取各管吸光值 A
    【注】若测定管的 A 值大于 1,则需将样本进行稀释(用提取液稀释)或减少样本加样量 V1(如减至 20μL
    则试剂二相应增加),稀释倍数 D 或样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、按样本质量计算
    FCμg/g 重量)=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D
    =193.3×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D
    2、按细胞数量计算:
    FCμg/104 cell=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D
    =0.39×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D
    3、液体中 FC 含量计算:
    FCμg/mL=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D
    =193.3×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)
    C 标准---0.5μmol/mL
    Mr=386.6---胆固醇分子量;
    V1---样本加入体积,0.04mL
    V2---标准品加入体积,0.04mL
    V---提取液体积,1mL
    D---稀释倍数;
    500---细胞数量;
    W---样本取样质量。

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