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- 技术资料
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 库存:
100
- 样本:
血清、血浆及相关液体样本
- 标记物:
HRP标记
- 适应物种:
植物
- 应用:
仅供科研
- 检测方法:
双抗夹心
- 检测范围:
详见说明书
- 规格:
48T
植物黄酮醇合成酶(FLS)ELISA试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
6.有效期:6个月
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验病理改变为多种致病因素引起的进行性关节软骨变性,破坏及丧失,关节软骨及软骨下骨边缘骨赘形成,由此引起一系列的关节症状和体征。有研究者对滑膜细胞进行原代培养,应用流式细胞仪鉴定滑膜细胞类型,提取蛋白进行双向电泳分离,比较 RA 与 OA 成纤维样滑膜细胞 (Fibroblast-Like Syno-viocytes , FLS) 蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异,结果显示: RAFLS 蛋白酪氨酸磷酸化较 OAFLS 明显增多,其中以相对分子质量 42 × 10 3 ~95 × 10 3 间蛋白酪氨酸磷酸化位点居多
50 median effective dose 半数有效剂量 EDTA ethylendiaminotetraacetic acid 乙二氨四乙酸 EK epidermal keratin 表皮角蛋白 ELISA enzyme-liked immunosorbent assay 酶联免疫吸附分析 EM electron microscope 电镜 ENK enkephalin 脑啡肽 L-ENA (L-NK) Leu-enkephalin 亮氨酸
用张龙翔书里的办法,先提卵类粘蛋白,首先过SEPHADEX G-25 柱子脱盐,然后过DEAE纤维素离子交换柱;第二步是用卵类粘蛋白合成SEPHAROSE-4B亲和柱。这些层析过程都可以在缓冲液里面加0.02%的叠氮化钠抑菌吗?以后怎样去除? 我提胰蛋白酶粗酶用的乙醇,可以用异丙醇或正丁醇或其它的低分子醇吗?浓度多大为好? 那实验我知道,你用什么方法活化琼脂糖呢,胰蛋酶的亲和纯化方法很多,配基有大豆胰蛋白酶抑制剂,抑肽酶,苯甲脒类,特别是后面的苯甲脒,可以买到现成的苯甲脒琼脂糖凝胶,何必自己去提取











